p16基因在骨肉瘤中的表达.pdfVIP

维普资讯 怀化 医专学报 JOURNALOFHUAIHUAMEDICALCOLLEGE 2007，6(2) p16基因在骨肉瘤 中的表达 陈 强 (江苏省响水县人民医院骨科，江苏 响水 22460o) [摘 要] 目的 探讨 p16基 因的表达与骨 肉瘤的关系。 方法 采用 RT—PCR方法检测骨 肉瘤 中 p16mRNA表达情况 。 结果 不同病理级别骨 肉瘤组织 中p16mRNA表达均有不 同程度下降，骨 肉瘤 II～m 级患者下降比较明显。 结论 p16基 因在骨 肉瘤中的表达明显低于正常骨组织，可能与骨 肉瘤 的发生发展密 切相关。 [关键词] p16； RT～PCR； 骨肉瘤 [中图分类号] Q786 R738、1 [文献标识码] A [文章编号] 0163 (2007)02～0025～02 骨肉瘤是原发于骨组织 的常见恶性肿瘤 ，约 占 裂像多见 ，每个高倍视野有 3个 以上)，7例。正常 骨恶性肿瘤的 1／3，生物学行为多呈高度恶性 ，血道 骨组织标本5例。所有标本于手术切下后立 即置液 转移率高且出现早 ，多发生在骨骼生长发育的旺盛 氮中保存。 时期的四肢长骨 ，年龄越大 ，发病率越低。其病 因和 1．2 总RNA提取 取 50mg骨组织，置于 1．5ml离 发病机理迄今 尚不清楚。恶性肿瘤的发生是由于癌 心管中，加入 1mlTrizol，混匀，室温静置 5rain。加入 基因被激活、抑癌基因失活所导致 的癌细胞异常增 0．5rnl氯仿，振荡 15s，静置 2min。4cI=离心 ，15000 殖的结果 。p16基 因是一种新型抑癌基 因，它能够 rpm×10rain，取上清。加入 0．5ml异丙醇 ，将管中液 最直接地抑制肿瘤发生 ，且与许多肿瘤的发生发展 体轻轻混匀 ，室温静置 10rain。4cI=离心 ，15000rpm× 密切相关 。p16基因是细胞增殖周期的调节和抑制 10rain，弃上清。加入 1ml75％乙醇 ，轻轻洗涤沉淀。 者。其抑癌机理与细胞周期 的调控密切相关 ¨J。目 4cI=离心，10000rcf×5min，弃上清。晾干 ，加入 20± 前有关 p16基因表达与骨 肉瘤 的关系研究较少 ，本 l的DEPC水溶解 (65cI=促溶 10～15min)。甲醛变性 研究选取21例骨 肉瘤手术标本及 5例正常骨组织 胶电泳检测其完整性 。采用紫外分光光度计 ，测定 标本 ，应用 RT—PCR方法 ，检测骨 肉瘤中p16mRNA OD260及 0D280值 ，计算 RNA总含量。 的表达水平 ，探讨其在骨 肉瘤发生 中的生物学意义。 1．3 逆转录反应 在 20 l的反应体积中依次加入 1 材料与方法 骨组织总 RNA2．0-t-l，10×BufferRT2．0 ±l；5mM 1．1 标本 收集 响水县人 民医院骨科2004年 1月 dNTPmix2．0±l；Oligo—dT12— 18primer2．0±l；Re- 至2006年 12月骨肉瘤手术切除的标本 21例 ，其 中 verseTranscriptase1．0±l；DEPCH2O 11．0--tl；置 于 男性 15例 ，女性 6例 ，年龄 15～50岁 ，平均 25岁。 37cI=孵箱中反应 1h，接着 95cI=灭活 5min，再立 即 按组织学中所见肿瘤细胞形态和分化程度将骨 肉瘤 冰浴，一20cI=备用。 分为三级 ：I级为高分化型 (细胞 略呈异形性改变