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铽对辣根细胞质膜外向钾电流的影响 江娜，陆天虹，黄晓华* (江苏省生物功能材料重点实验室，南京师范大学化学与环境科学学院，南京 210097 , Email: wxxhhuang@ ） 随着稀土元素(REEs)在农业、工业、畜牧业、医药卫生等方面的广泛应用，REEs在环境中积累 并通过食物链进入人体，影响环境安全和人体健康[1] 。因此，国内外学者从器官、组织和细胞的层 面上对REEs 的毒理效应进行了研究[2, 3]。 本课题组以前的研究表明，铽(Tb) 能够跨越细胞膜进入辣根叶肉细胞。细胞膜上存在大量参与 离子吸收、转运以及维持离子平衡的蛋白，这些膜蛋白可分为离子载体和离子通道两大类。细胞膜 上的通道主要有，K+ + 2+ - + 、Na 、Ca 、Cl 通道。钾是植物生长发育的必需元素，K 是植物细胞质内含 量最为丰富的阳离子，细胞需要高浓度K+来平衡有机酸及大分子阴离子基团所带的负电荷，从而维 持正常的蛋白结构。同时K+ [6] 还有降低细胞水势、快速有效调节跨膜电位等多种重要功能 。因此， K+通道的作用不容忽视。本文以辣根为代表性植物，Tb3+为代表性的REEs离子，用膜片钳全细胞记 录方法、研究了Tb3+ + 对辣根叶肉细胞膜外向K 通道电流的影响，从一新的角度揭示REEs毒害植物的 细胞学机理。 膜片钳全细胞记录步骤如下：将酶解得到的原生质体置于含2mL细胞外液的样品池中。在倒置 显微镜上用膜片钳仪，当玻璃微电极尖端与细胞膜形成高电阻封接( 电阻为1~5GΩ) 时，对电极内腔 加负压破膜可形成膜片钳全细胞记录方式。测试时保持电压-47mV ，刺激电压从-55mV逐级去极化到 +85mV ，每级为+20mV ，持续时间为2s ，频率为0.2Hz。检测辣根叶肉细胞原生质体K+ out 电流信号。 该外向K+ + 电流的尾电流反转电位在-35mV左右，接近于K 的理论平衡电位值(-56mV)。然后，在细胞 外液中加入不同浓度的Tb3+后。发现不同浓度Tb3+对K+ out 电流产生了不同程度的作用，且随Tb(III) 浓度增加，作用显著增强，说明外向K+ out 电流对Tb(III)具有浓度影响的显著依赖性。更说明质膜外 向K+ out 通道的膜外侧对Tb3+敏感。 由文献知，叶肉细胞质膜外向K+ + 通道受抑制可以阻止叶肉细胞K 流失，这对保持叶肉细胞膨压 有利，从而有利于保持叶肉细胞的水分。从本实验结果可得，Tb3+ + 增加了叶肉细胞质膜外向K 通道 电流，这样不利于保持叶组织的水分，也不利于光合作用的进行，对细胞具有伤害和毒害作用。 感谢国家及江苏省自然科学基金（No）资助。 参考文献： [1] 倪嘉缵, 稀土生物无机化学[M]. 北京: 科学出版社, 1995: 8-27 [2] Liu H X, Yuan L, Yang X D, Wang K, Chemico-Biological Interactions, 2003, 146(1): 27-37 [3] Palasz A, Czekaj P, Acta Biochimica Polonica, 2000, 47(4): 1107-1114 3+ + Effects of Tb on Outward K Channels at Plasma Membrane in Horse