针刺足三里、肾俞穴对快速老化脑萎缩模型小白鼠(SAM-P%2f10)肝细胞核蛋白影响实验研究.pdfVIP

第四部分：基础研究 6．同[2] 7．魏勇主编，医学生物化学，第一版．北京：世界图书出版公司，1992：264 针刺足三里、肾俞穴对快速老化脑萎缩模型小白鼠 (SAM—P／10)肝细胞核蛋白影响的实验研究 杨增瑞 指导：石学敏教授 天津中医学院第一附属医院300193 M．一R／1正常老化小白鼠为材料，分离纯化了其肝细胞 本研究以SAM--P／10老化鼠及SA 蛋白增龄性变化的影响，电泳结果及扫描图表明，针刺SAM—P／10老化鼠后，与对照组相比， 肝细胞核蛋白发生了量的变化，足三里穴对6月龄鼠的作用优于肾俞穴，肾俞穴对12月龄鼠 作用明显。 SA卜P／10老化鼠是日本学者研究开发的与人类老化基本一致的自然快速老化动物模 型，其特点是随增龄自然出现老化诸特征，在成熟期(4至6月)过后。进入快速衰老期，表现 为行动迟缓、皮毛无光泽、脱毛、脊柱弯曲等外在表现和学习、记忆障碍及脑萎缩，平均寿命 异常变化有关。本实验通过研究针刺足三里、肾俞穴对SA硌一P／lO肝细胞核蛋白的影响，以 探讨针刺延缓衰老的作用机理。 1材料与方法 1．1材料 (1)实验动物及分组 选择本院繁殖饲养的6月龄、12月龄 SA M．一P／lO小白鼠各24只，随机分为对照组、足三里组和肾俞组，每组8只，雌雄各半。 (2)试剂 蔗糖、三羟甲基氨基甲烷、苯甲基磺酰氟、乙二胺四乙酸钠盐、丙烯酰胺、N、N-亚甲基双 丙烯酰胺、十二烷基硫酸钠、过硫酸铵、甘氨酸、B—巯基乙醇、溴酚蓝、甘油、考马斯亮兰、无水 乙醇、乙酸、蛋白质分子量标准品。 1．2方法 (1)穴位选择及针刺方法 根据中国针灸学会实验针灸研究会制定的“动物针灸穴位图谱”分别选取足三里(双)、肾 俞(双)，用捻转补法20秒钟，各组每日针刺一次，周日休息，SAAI_P／10对照组，每日进行与针 刺组相同时间程度的捉抓，共持续四周。 (2)细胞核的分离及鉴定 采用蔗糖水溶液法分离细胞核，在光镜下观察到的纯核制品，符合要求。 中国·天津第六届国际针灸暨中医临床学术大会论文集 (3)样品的预处理 将定量分析后的蛋白质样品(1ug／u1)，加入等量上样缓冲液，在沸水中加热3分钟，自然 冷却，留待上样，上样量为20ml。 (4)SD卜PAGE的制备 采用不连续缓冲系统，使用l衄厚的板胶，分离胶浓度为8—12％的梯度胶，浓缩胶浓度 为5％，以％r甘氨酸作为电泳缓冲液。 (5)染色及脱色 卸胶后用o．25％考马斯亮兰染色过夜，再用甲醇、乙酸混合溶液脱色至背景为白色。 (6)扫描 用IKB一光密度扫描仪扫描蛋白质凝胶谱带，并对扫描结果进行分析。 2结果 表1针刺对6月龄SAM-呻，，10肝细胞核蛋白质的影响 分析： 表2可以看出，针刺可分别调节这两种趋势，6月龄时，足三里组调节作用优于肾俞组，12月龄 ‘ 时，肾俞组作用优于足三里组。 3讨论 本次实验选取了临床常用的抗衰老穴位足三里及肾俞穴。足三里穴为足阳明胃经的合 穴，也是著名的强壮保健要穴。宋·医说》谈到：“若要安，三里莫要干”。 古今中外应用此穴防抗衰老的文献记载颇多，临床及研究资料表明，它能提高机体的免疫 功能，使衰老的免疫功能下降得到改善。本次实验研究发现，针刺足三里后，对于6月龄鼠的 作用较明显，提示了足三里的预防保健作用。肾俞是足太阳膀胱经背俞穴，为肾之精气转输于 背部的处所，为人体补肾要穴。肾为先天之本，命火之根，人体生长发育及衰老与肾气的盛衰 有密切关系，老年期常有肾气虚衰的表现，本实验发现，针刺肾俞穴，对12月龄肝细胞核蛋白 的调节作用较明显，表明肾俞对于肾气亏肾精虚有较好的作用，中医理论认为，肝藏血，肾藏 精，精血互生，乙癸同源，因此针补肾俞具有补益肝肾之功，补益肝肾可能与调节肝细胞核蛋白 代谢有重要关系。 针刺预防和治疗衰老性疾病主要是通过调整机体功能以抵抗或减弱各种致病衰老因素