HSP70-2调控小鼠精原细胞减数分裂1期中CDC2激酶活性.pdfVIP

HSIy70—2调控小鼠精原细胞 减数分裂1期中CDC2激酶活性 朱大海1 Mi汕E埘 哈尔滨工业大学细胞与分子发育生物学实验室1 of bboIaloly Develop唧talBiolo舒．N皿鹏，NI砰 【摘要】细胞周期蛋白(cyelill)B依赖型的cDc2激酶活性在促进有丝分裂和减数分裂 c2期到M期过渡中起重要作用。地p70一2基因只在生精细胞以显著水平表达。在 }hp70一2基因敲除(Hsp70一2。‘)的小鼠中，初级精母细胞不能完成第一旋减数分裂， 这暗示在砖p70一2热休克蛋白与精子发生的这一时期的cD(2激酶活性之间存在联 系。地p7i。一2蛋白家族的成员是介导蛋白重新折叠、转运和多聚体组装的分子伴侣。 用免疫沉淀耦联的w目t舡Il印迹杂交和显示Hsp70—2与CD(2在小鼠睾丸中相互作用 的体外重组实验的研究表明它可能是Ⅱ)c2的分子伴侣，并且是cD(可cyclillB复合体 形成所必需的。以往的研究报道在小鼠睾丸粗线期精母细胞中大部分cDc2有激酶活 性。在野生型小鼠睾丸中存在皿H=2对纽蛋白H1的激酶活性，而在H9p70—2“。的小 鼠睾丸中几乎不存在，很可能是由于缺乏cD(驯cychnB的复合体的形成。进一步，在体 外实验中将地∥70一2加到新鲜的mp70—2“一小鼠睾丸提取物中，不仅恢复了CD(刭 CvchIlB复合体的形成，而且恢复了cD(2的激酶活性。这些研究表明导致地p70—2“一 小鼠精子生成过程中第一次减数分裂失败的原因是在粗线期精母细胞中cD(驯CycbnB 复合体的解体，因而阻碍了促进岛，M期过渡所必需的cDQ激酶活性。这些研究为揭 示碰；P70分子伴侣与cD∞激酶活性之间的联系在精子生成中减数分裂细胞周期中的 必要性提供了新的体内实验证据。 一、前 言 真核细胞有丝分裂从cl进人S期及岛期到M期的过程受周期素依赖性蛋白激酶皿临的 化细胞周期蛋白的替代，细胞周期蛋白和CDK的特异性抑制，CDK和细胞周期蛋白的合成速率 及周期性的消亡，cDc2激酶的活性在有丝分裂的细胞周期中也相应的变化。 在更加高等的生物体中，相对于有丝分裂细胞周期调控来说，人们对于减数分裂中细胞周期 一】00— 另外，人们已克隆到表达于小鼠睾丸中的A型和B型细胞周期蛋白cDNA，并对小鼠精子发生过 程中各种cDK和细胞周期蛋白Ⅱ删她的表达方式进行了检验。 量出现。另外，在野生型精母细胞双线期细胞周期蛋白B和CDc2蛋白得以大量表达，而生殖细 胞缺陷型小鼠睾丸中只能检测到少量cDc2，且检测不到细胞周期蛋白B的存在。而且CD(=2激 酶活性主要在精原细胞粗线期表达，而体细胞或野生型小鼠睾丸的早期生殖细胞中只有少量表 G，M期过渡中起着必不可少的作用。 许多HsP家族成员属于分子伴侣，在许多过程中发挥着重要作用，如分泌、糖皮质激素反应 和分化中可能起一定的作用。 并且其表达受阶段性调控。}砩70一2的合成开始于第一次减数分裂早期，这暗示其在精子发生 过程减数分裂细胞周期中发挥独特作用。为了决定}姊70一2的功能，我们利用基因打靶技术 (日∞etar科ing)，导致初级精母细胞停止在第一次减数分裂期，继而凋亡，导致了小鼠的无精不 鼠精子发生的第一次减数分裂过程中起特定作用。 互作用可以引发小鼠精子发生的第一次减数分裂中岛，M期过渡。为验证这个假设，我们应用免 疫共沉淀及wst一杂交来检验雄性小鼠生殖细胞减数分裂周期中}却70—2的结合蛋白。结果 cD∞不能够与}却∞一2结合，同时不能发挥激酶作用。在体外实验中，将重组}kp70—2蛋白加 cKIlB复合体形成中的分子伴侣。 二、结果与讨论 1．在小鼠精母细胞中IlsP70一2与a明c2相互作用 通过免疫沉淀耦联的wa畹n印迹杂交我们证实，在小鼠睾丸中璐】珊一2与血}呓．而不是 与细胞周期蛋白B结合；而这种相互作用的缺失则可能是地d70一2“‘雄性小鼠减数分裂停滞的 主要原因。据此我们提出了cD(捌cycUnB复合体形成模型如图1。 尽管以前曾有研究报道鹏P在减数分裂的细胞周期中发挥作用，