数控剪切流微流体技术及其在细菌生物膜研究中的应用【精选】.pdfVIP

微生物与感染 JournalofMicrobesandInfections， · 新 技 术 与新 仪 器 · 数控剪切流微流体技术及其在细菌生物膜研究中的 应用 蔡霞 ，郝殿明 ，瞿涤 1．复旦大学基础医学院教育部 ／卫生部医学分子病毒学重点实验室，上海 200032；2．冷泉港生物科技股份 有限公司，上海 200122 细菌生物膜是指微生物 (细菌、真菌等)黏附、聚 数控剪切流微流体技术能模拟体内的剪切流作 集形成的一个群体，该群体产生并分泌胞外聚合物 用，以外部流体注射泵为动力源，可精确控制恒流气 (extracellularpolymericsubstance，EPS)，形成一 压以模拟体内剪切力环境，观察不同剪切力作用下 定的三维结构，含有营养物质、氧气等生长必需物质 生物膜整体水平的变化。数控剪切流微流体技术的 交换的通道 ，微生物细胞在 EPS中增殖、生存[。 核心是孔板微流控技术 (图1)。数控剪切流微流体 生物膜结构可阻止抗生素或抗体等大分子有效杀伤 技术 中所用 24孔或48孔生物流板与普通孔板的不 微生物细胞，目前 尚无有效的预防措施和治疗方法 同之处在于：其底部整合有微米级 的微液流管道 控制细菌生物膜所带来的危害。对细菌生物膜形成 (370Fmx70Fm)，将输入孔(inputwel1)与输出孔 机制的研究能为预防和解决生物膜引起的各种问题 (outputwel1)连接 ，该微液流管道为反应区和成像 奠定 良好的基础。在生物膜研究中，需模拟体 内或 区(显微镜观察区)。通过 Montage软件控制生物 多种环境以观察生物膜形态及生物膜的形成，检测 流调节器，精密调控输入微孔板的气压，以控制微液 生物膜细菌基因组和蛋 白质组的表达等 。因此，细 流管道 内液体剪切力。含微液流管道的生物流板底 菌生物膜的研究有赖于稳定及高通量的实验技术和 面厚 180Fm，可用于相差显微镜、荧光显微镜或共 研究手段。 目前生物膜体外检测技术主要有：①试 聚焦显微镜等观察并获取图像。微液流管道也可预 管法_2]，其优点是简单快捷，但无法大规模筛选；② 先包被特定蛋白、黏附因子、单细胞层或其他物质， 微孔板法 ]，适用于大量分析细菌生物膜 的形成能 用于分析细胞与细胞、细胞与受体之间的相互作用。 力，但不便于深入观察和分析生物膜的结构与功能； 此外，生物流板还配有密闭盖，可将生物流板密封 ， ③静态生物膜培养技术_4]，可用激光共聚焦显微镜 保证实验过程中的生物安全 。 或扫描显微镜观察和分析生物膜的结构，但无法模 数控剪切流微流体技术可用于观察细菌在模拟 拟体 内剪切流环境；④流式生物膜培养技术 (flow 体内剪切流情况下形成生物膜的生理过程，或研究 cellsystem)[5]，通过动力泵控制培养液的流速 ，将 在药物或环境压力因子作用下生物膜或细菌生长的 培养液等泵向流动池 (flowcel1)模拟体 内剪切流环 定量检测，分析生物膜的结构，以进行高通量的抗生 境，细菌生物膜在流动池的流动通道中生长，在显微 物膜药物筛选分析 。数控剪切流微流体技术用于细 镜下可实时观察生物膜 的生长状况，但通量低且操 菌生物膜实验的主要步骤包括：①实验设计：决定使 作复杂；⑤数控剪切流微流体技术_6]，利用微流控芯 用细胞 ／细菌的种类、测试的药物种类和浓度、观察 片技术模拟体 内流体剪切力，使微液流管道 内液体 时间、培养温度等实验参数；②试剂准备：培养基的 剪切力保持一致，并在 24孔或48孔板等底部构建 选择、含有的特殊成分及 pH值等(根据所研究的细 微流体装置，可进行高通量筛选，实验结果可靠，重 菌决定)