双重包埋法在内耳切片中应用.pdfVIP

2011年全国病理技术新进展研讨会论文汇编 3．2．2细胞保存液可及时并长期保存细胞，可反复多次制作涂片，方便用于免疫组化等进一 步的检查。 4涂片的规范 4．1干燥的涂片会使细胞胀大变形，导致细胞核着色差，在镜下染色质结构不清晰。为避免 细胞干燥，涂片时应在避风处涂片(尤其在北方干燥季节)即不要在窗下，及风速流动大的 地方涂片。并且涂完后要及时湿固定。 4．2涂片的方法：包括棉棒拨散式涂沫，对拉式涂抹，用海绵吸附细胞后进行按压涂抹，笔 者在实际操作中观察，认为对拉式涂抹方法简便，快捷，细胞分布也均匀。方法：将吸管内 的细胞液滴在玻片上1．2滴，将另一张玻片相对贴附在一起，向相反方向对拉涂抹，如一次 不匀，可反复多次贴附对拉，这种方法最大的优点是由于是贴附对拉，在天气干燥时使细胞 不会快速风干造成褪变变形，且受力均匀，细胞分布亦均匀、平整。 4．3涂片要有一定的范围：在实际工作中我们观察到，细胞学涂片范围大易造成诊断视觉疲 劳，液基技术的出现受到欢迎的一点是涂面的统一规范。针对传统涂片我们也应规范涂片的 范围。我们规定涂面占标签以外玻片的1／3．1／2。而不再满片涂抹，如沉淀物多，可相应多 涂1．2张。 4．4涂片的厚薄：在涂片时技术人员应掌握好涂片的薄厚度，如沉淀物多，可视情况多涂1．2 张，但一定每张不要厚涂，会造成细胞的叠加，并可致苏木素染色加深等问题，影响诊断。 适宜厚度应在肉眼观其为淡淡的毛玻璃状为佳，在工作中要用心体会。 4．5避免涂片细胞的脱落：涂片上水分太多可导致涂片侵入95％乙醇固定或染色中大量细胞 脱落。吸取沉淀物方法：标本离心后轻轻倒去上清液后离心管不要立即竖起(避免残余管壁 液体回流与沉淀物混合，稀释沉淀物，导致沉淀物含水量多)。将离心管保持倾斜位置，用 吸管将沉淀物吸取，涂片。 5染色 5．1重视染液的使用期限：每次配制完染液，如苏木素、，伊红、EA50染液等，我们直接在 染缸上清楚标记配制时间，一目了然，保证工作人员掌握染液的新鲜度并能控制好染色时间。 5．．2避免造成交叉污染：细胞学容易脱落，应充分固定15．30分钟后，再进行染色，在染色 前应用水轻轻冲洗一下，再放入苏木素内。按照染色涂片数量，要求苏木素染液每隔3-6天 滤过一次，避免染液内残留细胞粘附于玻片上，造成污染。 6封片 6．1每张涂片必须封片：封片的目的是让片子能长期保存；在镜下清晰展现细胞的微细结构： 便于诊断时在片上做标记；减少读片时的空气污染。不应再在涂片上直接涂抹树脂胶。 6．2盖玻片避免污染：尤其是厂家购买的免洗型盖玻片，每开一盒都要认真检查盖玻片的清 洁度，如遇粘黏等情况要停止使用，避免霉菌污染，以防造成误诊。 以上是我们在工作中所感受到应该被重视的几个环节，希望通过技术交流，使我们在细胞学 技术上增长更多的知识。 38．．双重包埋法在内耳切片中的应用 李颖范尔钟 北京市耳鼻咽喉科研究 通过多次实验，综合石蜡和火棉胶包埋的优缺点，对双重包埋法进行改进，摸索出操 作简便易行，危害较小，组织结构完整，且可同时应用于多种染色的内耳切片制作方法。 77 2011年全国病理技术新进展研讨会论文汇编 l材料与方法 1．1材料：选取健康豚鼠及大鼠，体重分别在250．320克和180．200克之间。 1．2实验方法：(1)取材和固定：将动物麻醉后迅速断头取听泡，暴露耳蜗，挑破圆窗膜，去 除镫骨。放入4％多聚甲醛中固定24小时。(2)脱钙：用10％EDTA脱钙一周，并隔日换液。 (3)脱水：将标本依次浸入70％酒精、80％酒精、90％酒精各12小时，95％酒精I、II各2 小时，100％酒精I、II、III各1．5小时，等量纯酒乙醚过夜。(4)浸胶、透明：入5％火棉胶 一周，取出放入氯仿中硬化兼透明16．18小时。(5)浸蜡、包埋：浸入软蜡3小时、硬蜡I、 II共3小时，将蜗轴平行于包埋框一边，石蜡包埋。(6)切片：平行于此边切片，片厚5微米。 (7)染色：对豚鼠及大鼠的耳蜗切片分别进行HE染色及免疫组化染色。免疫组化染色一抗分 别为Neurofilament 型二步法检测试剂盒PV6000，购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 2结果 2．1HE染色：内耳结构完整、清晰，各细微结构完好，颜色鲜艳。 2．2免疫组化染色：阳性部位明确、深染，背景清晰。 3讨论 内耳作为重要