应用胚胎皮肤前体组织修复皮肤创面实验研究.pdfVIP

22、应用胚胎皮肤前体组织修复皮肤创面的实验研究 吴军1，黄正根1，罗高兴1，贺伟峰1，谭江琳1，王晓娟1，胡婕1，杨世 伟1，彭旭1，杨俊杰，彭彦孟，甘成军1，贾雄飞1，陈希炜1，程文广1， 袁顺宗1，张小容1， 葛良鹏2，魏泓2 l：创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室，第三军医大学西南医院全军烧 伤研究所，重庆，400038 2：第三军医大学基础医学部实验动物学教研室，重庆，400038 【摘要】随着干细胞及组织工程的发展，创伤修复取得了很大的进步，然 而如何提高大面积烧创伤患者的愈后功能、改善其生活质量仍旧是医学工 作者面临的巨大挑战。近年有研究表明特定胎龄的猪或者人胚胎前体组织 ／器官(肝、肾、胰、脾等)异种移植后既能够生长发育成为相应的成熟组 织(或器官)又不形成畸胎瘤，且能发挥一定的生理功能。胎猪皮肤前体组 织是否也具有这种特性呢?我们对此做了系统的研究。目的拟解决大面积 烧、创伤后创面覆盖材料来源，改善创面愈合质量等问题，我们系统评价 了5个不同胎龄的胎猪皮肤前体组织的移植后生长潜能及成瘤性，探讨其 应用于大面积烧、创伤创面的可能性及其可能的机理。材料与方法一、精 确制胎龄：8—10月龄贵州香猪(皮、毛均为黑色)，定期配种，严格控制 交配时间，其受孕的误差控制在1天之内。二、动物模型：本研究采用精 确胎龄为56天(E56)的胎猪皮肤前体组织对3种不同的移植模型进行了对 比，观测移植后的生长特性。①背部创面移植模型：裸鼠背部正中开创至 肌膜上，创面植入胎猪皮肤前体组织微粒悬液，用尸体皮覆盖、缝合：② 背部皮下移植模型：裸鼠背部正中横向切口至肌筋膜层，植入小块邮票皮， 缝合切口；③耳廓皮下移植模型：裸鼠双耳廓皮下穿刺行胎猪皮肤前体组 织微粒移植；背部创面模型及耳廓皮下模型新生组织块大小采用双样本t 检验。二、最佳“妊娠时间窗”筛选：选取了5个精确胎龄(E35、E42、 E56、E70、E91，E：胎龄天数)的胎猪皮肤前体组织，采用上述的背部创 面移植模型，观察移植后创面的愈合情况，于移植后6周及12周取材检 测新生皮肤组织的结构形态，评价成瘤性。应用角蛋白抗体(Cytokeratin MNF 116，DAKO)及波形蛋白抗体(VimentinV9，DAKO)行免疫组织化学染 色及黑色素染色鉴定新生组织的种属来源。移植后12周的新生组织块大 小采用单因素方差分析，比较其移植后的生长潜能。结果1、3种模型中 移植的胎猪皮肤前体组织均能继续生长发育成为具有表皮及真皮结构的 双层皮肤组织，其中背部创面移植模型及背部皮下移植模型观察到了汗 腺，皮脂腺及毛囊等附件，耳廓皮下移植模型未见汗腺；背部创面移植模 型的生长潜能远高于耳廓皮下移植模型的生长潜能。2、研究结果认为胎 猪皮肤前体组织异种移植后能够继续生长发育成为结构“完整”的成熟 皮肤。①各胎龄的胎猪皮肤前体组织移植均能生长发育为具有表皮、真皮 及毛发、皮脂腺及汗腺等附件的“完整”成熟皮肤组织；@E42的胎猪皮 肤前体组织具有最大的生长能力(新生组织平均大小为47．1mm2，L×W)， E56为31．1mm2，E35为18．4lnm2，E70为20．1mm2，E91为6．5mm2；③ 89 免疫组织化学染色及Fortana法黑色素染色症实新生皮肤组织的真皮和 表皮均为猪来源。④新生的皮肤组织大部分胶原纤维排列规则，表皮钉突 明显。⑤E56及之后胎龄的胎猪皮肤前体组织异种移植后未发现形成畸胎 瘤。结论i、裸鼠背部创面加盖异种皮移植胎猪皮肤前体组织微粒的方式 是简便、有效的移植模型。2、E56的胎猪皮肤前体组织具有良好的移植 后器官发育成力、生长能力及安全性。3、胎猪皮肤前体组织异种移植的 最佳“妊娠时间窗”在胎龄56天左右。 23、烧伤感染术语及诊断标准的商榷 彭毅志袁志强 第三军医大学西南医院全军烧伤研究所，重庆，400