不同作用机制的5-脂氧化酶抑制剂筛选方法的建立与应用.pdfVIP

不同作用机制的5-脂氧化酶抑制剂筛选方法的建立和应用 朱京童 郑智慧 路新华 任晓 马瑛 范玉玲 蒋沁 张华 （1.华北制药集团新药研究开发中心，2.微生物药物国家工程研究中心 石家庄050015 ） 摘要：目的 5-脂氧化酶是抗炎药物的重要靶点，本研究拟建立用于不同作用机制的5-脂氧 化酶（5-lipoxygenase ，5-LOX ）抑制剂体外高通量（high throughput screening ，HTS ）筛选体 系并用于筛选。方法：通过调节反应体系中Fe3+ 的浓度，在96孔板上建立两种酶反应体系。 结果：建立了不加Fe3+和外加10mMFe3+ 的两种5-LOX酶反应体系。铁离子螯合抑制剂齐留通 在未加Fe3+ 的反应体系对酶有强的抑制活性，其IC50值为0.21µM ，在外加10mMFe3+ 的反应体 系对酶无作用。非铁离子螯合抑制剂去甲二氢愈创木酸在两种反应体系对酶的IC50值基本相 同，分别为0.52µM 和0.93µM 。两种反应的Z’ 因子值分别为0.62 和0.81 ，信号/ 本底 （signal/background ，S/B)值分别为5.02和37.81 。利用该方法从微生物代谢产物中筛选到活性 化合物WF-5239和Trivaric acid ，其中化合物WF-5239和Trivaric acid在未加Fe3+ 的反应体系对 酶有强的抑制活性，其IC50值为2µM ，在外加10mMFe3+ 的反应体系对酶无作用，推测可能为 铁离子螯合型抑制剂。化合物Trivaric acid在两个筛选体系对酶的抑制作用基本一致，其IC50 值均约为5.36µM ，推测可能为非铁离子螯合型抑制剂。结论: 本研究建立了灵敏、稳定的可 用于不同作用机制5-LOX抑制剂筛选的方法。 关键词：5-脂氧化酶；抑制剂；铁螯合；炎症 Development and Application of a Screening System for Distinct Mechanism 5-LOX Inhibitor ZHU Jing-tong,ZHENG Zhi-hui,LU Xin-hua,REN Xiao,MA Ying,FAN Yu-ling,JIANG Qin, ZHANG Hua (1.New Drugs Research Development Center of North China Pharmaceutical Group Corporation 2.National Microbial Medicine Engineering Research Center, Shijiazhuang 050015) ABSTRACT ： OBJECTIVE To establish high throughput screening systems for 5-lipoxygenase (5-LOX) inhibitors with distinct inhibitoy mechanism.METHODS The 3+ concentration of Fe in reaction buffer was modified. To develop 96-well versions, which are 3+ applicable to high throughput screening. RESULT Two assays of with or without additional Fe were developed. Zileuton, an iron-chelation inhibitor, showed strong inhibitory activity against 3+ 5-LOX in the assay without additional Fe with the IC50 value of 0.21 µM, but