中药抗癌作用现代实验研究方法.pdfVIP

2005亚太地区中西医结合学术论坛 中药抗癌作用的现代实验研究方法 陈炳忠1田庭芳2 1．香港大学中医药学院 2．香港理工大学京港中医中心 大部分中药都是植物药。在医药发展史上，植物药有著重要贡献。例如洋地黄、奎 宁、阿托品、吗啡、利血平、麻黄素、马钱子碱等都是从草药中发现的，尽管当时它们都 没有经过双盲法临床研究，但它个的疗效是确切的， 现在己获得公认，并为后来新一代药 物的研究发展提供了重要的根基。 西方医学界对植物药抗癌作用的研究亦甚为重视。西医所使用的抗癌化疗药物有不少 实验研究与临床研究都是药物开发所必须的。本文介绍近年来西方医学科学家对植物 药抗癌作用的实验研究所探用的一些方法， 其中较新的分子遗传学方法尚未普通用于中药 抗癌作用的研究，因而对抗癌中药的研究提供了一个尚待开发的领域。 一般而言， 植物药抗癌作用的实验研究有三个主要步骤：①选择研究对象； ②确 定该药是否能杀灭或抑制癌细胞：③研究该药抗癌作用的机理。 如何选择研究对象 在众多声称有抗癌作用的植物药中如何选定值得研究的对象?通常是根据医史文献记 载和临床报道提供的线索，进行分析，或根据民间经验和流行学调查分析筛选研究对象。例 如近年西方医学家通过流行学调查分析发现姜黄可能有预防和治疗癌症的作用，因而兴发 了姜黄研究热，至今已有逾干篇研究论文发表于一些重要的国际性医学期刊上。美国国立 癌症研究所己经用姜黄进行I期临床试验。 如何确定中药的抗癌作用 一个药物是否有杀灭或抑制癌细胞的作用，可用下列方法确定。 l MTT法 tetrazolium MTT(5一diphenyl 此反映细胞死亡的量。例如培养癌细胞经姜黄素处理过后，与未经处理的培养癌细胞相比 ，MTT被还原量明显减少，反映姜黄素使大量癌细胞死亡。MTT法还被用于中药复方的抗 癌作用的研究。 4l 专题报告 2SRB法 这是美国国立肿瘤研究所采用的方法。sulforhodamineB(SRB)是溶于水的粉红色染 料，可与生物大分子中的碱性氨基酸结合， 在515rlDl的OD读数与细胞数呈良好线性关系。 以此比较加药前后的细胞数， 可知细胞生长有无受到抑制。通过测定对照组细胞、用药 组细胞的吸光度(0D)值和加药时的OD值，可计算出药物有无抗癌作用及50％生长抑制 所需的药物浓度(Gl；。)和杀死50％癌细胞所需药物浓度(LC。．)。 3胸腺嘧啶核苷渗入法 胸腺嘧啶核苷是DNA合成的原料之一。用放射性同位素标记胸腺嘧啶核苷，测知胸 腺嘧啶核苷渗入DNA的量，可反映细胞增殖的情况。例如用sH标记的胸腺嘧啶核苷渗 入癌细胞培养液，测定细胞DNA合成对胸腺嘧啶核苷渗入量，亦发现经姜黄素处理可使胸 腺嘧啶核苷渗入量明显减少，反应姜黄使DNA合成障碍，癌细胞大量死亡。 4细胞凋亡 中药能否引起癌细胞凋亡可通过光学显微观察、核小体间DNA裂解检测或流式细胞仪 检查发现。 作为细胞死亡的形式之一，细胞凋亡的形态学特点是细胞核固缩，染色体DNA广泛断 裂，沿核膜浓聚成多形性高密度颗粒区，核膜铍缩；核膜崩解后包裹染色体片段形成凋亡 小体散布于细胞浆。这些变化可用光学显微镜观察发现。 体单位)，在琼脂糖凝胶电泳上呈现间隔180-200碱基对的特征性“DNA梯。 由于凋亡细胞DNA广泛出现许多不对称断裂点，利用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)在 众多游离在3·一oH端引人与荧光素偶联的dUTP作标记，可用流式细胞仪检测细胞凋亡。 未凋亡的细胞因为没有暴露的3，端，所以不会被检出。这个方法称为TdT介导的dUTP缺 mediated-dUTPnickend 口末端标记法(TdT labelingTUNEL)。西方医学界在研究中 药抗癌作用时也用了这种方法观察中药能否引起癌细胞凋亡。 抗癌作用机理的研究 若以上方法确定某种中药有