大豆BBi基因ihpRNA种子特异性表达载体的构建.pdfVIP

( ) Vol . 38 No . 1 第 38 卷 　第 1 期 西北农林科技大学学报 自然科学版 20 10 年 1 月 J ournal of Nort hwest A F U niver sit y (Nat . Sci . Ed . ) J an . 20 10 大豆 BBi 基因 ihp RNA 种子特异性 表达载体的构建 付永平 ,张 　君 ,王丕武 ,周海涛 , 曲　静 ( 吉林农业大学 农学院 ,吉林 长春 130 118) [ 摘 　要] 　【目的】构建具有大豆蛋白酶抑制剂BBi 基因反向重复结构的ihp RN A 种子特异性表达载体 ,并将其 转入根癌农杆菌中 ,为大豆品质改良奠定基础 。【方法】采用 PCR 技术克隆大豆蛋白酶抑制剂 BBi 基因的正义和反 α 义片段 、大豆种子特异性启动子 7 P 和作为内含子的 GFP 基因片段 ,分别连入克隆载体 p MD 18T Vector 中。然后 根据植物中ihp RN A 原理 , 以植物表达载体 p CA MB IA 130 1 为基础 ,将组成 RN Ai 载体的 4 个 目的片段分别连入其 中 ,然后利用冻融法转化根癌农杆菌 ,并进行 PCR 鉴定 。【结果】PCR 扩增得到组成 RN Ai 载体的 4 个 目的片段 ,分 α α 别构建成重组克隆载体和 ihp RN A 种子特异性表达载体 p 7 PGFPBBi S ,并转化得到含有 p 7 PGFPBBi S 的农杆菌 α E HA 10 1 和 E HA 105 。【结论】成功构建了具有 BBi 基因反向重复结构的 ihp RNA 种子特异性表达载体 p 7 PGF P BBi S ,BBi 基因的ihp RN A 表达框架成功转入到农杆菌中。 [ 关键词] 　大豆 ;蛋白酶抑制剂 BBi 基因;ihp RN A 表达载体 ;种子特异性启动子 [ 中图分类号] 　Q782 ;Q943 . 2 [文献标识码] 　A [文章编号] 　167 19387 (20 10) 0 1008307 Construction of ihp RNA se e dsp ecific exp re sse d vector of BowmanBirk inhibitor gene from soyb e an FU Yongping ,Z HAN G J un ,WAN G Piw u ,Z HOU Hait ao ,Qu J ing ( ) Col leg e of A g ricul t ure , J i l i n A g r