内毒素相关受体基因共转染肠上皮细胞的实验研究和其应用.pdfVIP

HCLM MLCCCC4002 LUULt 论文汇编 2．2 ampC基因的扩增及序列分析 本研究发现鲍曼不动杆菌耐药株的ampC核苷酸序列与标准株 经PcR扩增3株鲍曼不动杆菌及标准株E．cloacae29M的 ampC基因，均可获得一长度约900bp的DNA片段。将3株耐药丙氨酸一脯氨酸发生点突变外，其余均为同义突变。对于发生在 鲍曼不动杆菌扩增产物的ampC基因序列与Calleni等报道的鲍结构基因的突变，这种突变与耐药性可能有关，尚待进一步探讨 ABA9979基因序列对比分析．比较二者核苷 曼不动杆菌ampC 酸序列和氨基酸序列同源性，结果示：耐药鲍曼不动杆菌ampC 产AmpC酶的革兰氏阴性杆菌已成为医院感染的流行菌。 核苷酸序列与标准株ABA9979的同源性均为99％，核苷酸在 228位发生特异性突变，由GCG—CCG，在39位(A—G)、129位(T— 粗提物头孢西丁间接三维试验，即平板表面涂布的是对头孢西丁 G)、629位(G—A)、649(G—A)、789位(A—G)发生非特异突变，其 推导的氨基酸序列除在76位由丙氨酸一脯氨酸(Ala一76一Pro)发 生点突变外，其余均为同义突变。 解头孢西丁，产AmpC酶菌株的酶粗提物在沟槽与抑菌圈交界处 3．讨论 出现扩大的长菌区域即蚀环现象这一原理来检测AmpC酶．该法 AmpC酶是主要由染色体介导的头孢菌素酶，近年也有报道避免了传统的头孢西丁三相试验因膜孔蛋白缺失导致的假阳性 由质粒介导的AmpC酶m，统称之为AmpC族酶。AmpC酶由”，虽然制备酶粗提物在操作上较费时，但仍不失为一种较经济的 检测方法。 ampC基因编码，anapC操纵子具有B内酰胺酶表达的调节模型， 它广泛存在于许多革兰氏阴性杆菌如肠杆菌属、铜绿假单胞菌、 产AmpC酶的临床分离株对除亚胺培南、头孢吡肟敏感外， 枸橼酸杆菌属等的染色体中。ampC基因在鲍曼不动杆菌中表达几乎所有B一内酰胺类抗生素均耐药，本实验对鲍曼不动杆菌的 的报道甚少。 药物敏感性显示：鲍曼不动杆菌耐药株对第三代头孢菌素头孢他 诱导性产AmpC酶革兰氏阴性杆菌，有较高频率的自发突定、头孢噻肟、氨曲南等呈中度或高度耐药，对头孢西丁高度耐 变，可达10。6～104，，突变可发生在ampC操纵子上，包括ampC基药，对第四代头孢菌素头孢吡肟、碳青霉烯类亚胺培南敏感，因 因突发，ampC启动子或衰减子突变“，调节基因的突变等，导致此，第四代头孢菌素和碳青霉烯类在治疗高产AmpC酶突变株引 AmpC酶活性或表达水平改变pI。通常认为突变发生在调节基因起的感染中将发挥重要作用。通过对肠杆菌属细菌进行ampC基 上，通过对产酶量的调控引起细菌耐药。国外Marre等报道．对 因检测，对于预防产AmpC酶在临床上广泛传播，指导临床正确 于发生在结构基因的突变，其对抗生素的水解活性不变，这种突 合理使用抗生素具有重要意义。 变对于耐药性无实际『临床意义[41。但Sonia等报道，在1)99菌株参考文献(略) 中发现289位丝氨酸突变…，其抗生素水解的动力学略受影响， 文中插图(略) CF-5 内毒素相关受体基因共转染肠上皮细胞的实验研究及其应用 张道杰 济南军区总医院实验诊断科250031 蒋建新 陈永华 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室 基因转染是将目的基因导人靶细胞的方法，是研究基因功 材料与方法 能和基因表达调控的重要手段，因此越来越广泛地应用于分子 一，主要材料、试剂来源： 生物学领域‘I。但转染成功与否及转染效率的高低受多种因素的 1．细胞株：人肠上皮细胞株(HIC)购自中国典型培养物保 影响，尤其是多种功能相关基因的共转染