盐藻PDS基因的同源克隆及在大肠杆菌中的表达.pdfVIP

Ｒesearch Paper 研究报告 微生物学报Acta Microbiologica Sinica 55 (2):149 － 155 ;4 February 2015 ISSN 0001 － 6209 ;CN 11 － 1995 /Q http :/ /journals． im． ac． cn /actamicrocn 10. 13343 /j． cnki． wsxb． doi : 盐藻PDS 基因的同源克隆及在大肠杆菌中的表达 * ， ， 周峰 黄非 白林含 ， 610064 四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室 四川成都 :【 】 PDS ， ， 摘要 目的 八氢番茄红素脱氢酶 为真核膜结合蛋白 我们通过更换不同的表达策略 探索在大肠 杆菌中表达真核膜结合蛋白的方式。 【 】 ＲACE PDS cDNA 。 方法 利用 的方法克隆盐藻 的全长 序列 利用 pET-28a pET-28a-PDS ; PLtac T7 pET-PLtac- 原核表达载体 构建 表达载体 使用 启动子替换 启动子构建 PDS ; Mistic pET-28a pET-Mistic-PDS 。 表达载体 合成 序列融合入 中构建了 融合表达载体 分别转化入大 BL21 (DE3 ) 。【 】 PDS cDNA 2237 bp ， 肠杆菌 中进行原核表达 结果 获得了盐藻 基因的全长 序列 开放阅 1749 bp， 582 (NCBI GQ923693. 1 )。 pET-28a-PDS pET-PLtac- 读框为 共编码 个氨基酸 登录号为 利用 和 PDS PDS ， ; pET-Mistic-PDS PDS 表达的 蛋白表达量低 并以包涵体形式存在 利用 载体表达的 蛋白表达量 ， ， 。 【 】 Mistic 明显提高 且大部分以可溶蛋白形式存在 具有脱氢酶活性 结论 实验结果表明 作为促溶标签 ， 。 Mistic 能促进膜蛋白的正确折叠 提高蛋白的可溶性 蛋白酶活测定结果证明了 的融合可以保持蛋白的 天然活性。 : PDS ; ; ;PLtac ;Mistic 关键词 盐藻 基因 同源克隆 原核表达 启动子 序列 中图分类号:Q933 文章编号:0001-6209 (2015)02-0149-07 膜结合蛋白在整个生物体蛋白组成中占30%