丁基苯酞对慢性脑缺血大鼠海马中p-CREB、CREB mRNA表达的影响.pdfVIP

幽 绫?008年第48卷 42期 丁基苯酞对慢性脑缺血大 鼠海马中p-CREB、 CREBmRNA表达的影响 康 康 ，滕军放h ，王书霞 ，邓文静 (1信阳市中心医院，河南信阳464000；2郑州大学第一附属医院) 【摘要] 采用手术结扎大鼠双侧颈总动脉制作慢性脑缺血大鼠模型，将大鼠随机分成对照组(A组)、单纯缺 血组 (B组)、缺血低剂量治疗组 (C组)、缺血高剂量治疗组 (D)。采用免疫组化法检测各组大鼠海马中p-CREB的 含量，RTP·CR方法检测海马组织中CREBmRNA的表达。结果 B组海马CREBmRNA、P—CREB蛋白的表达较A组 显著减少；C、D组较B组显著增高，D组增高更为明显(P0．05)。认为丁基苯酞可能通过增加海马p-CREB、 CREBmRNA的表达 ，对慢性脑缺血损伤起保护作用。 [关键词] 脑缺血，慢性；环腺苷酸反应元件结合蛋白；丁基苯酞；海马 [中图分类号] R743．3 [文献标识码] B [文章编号] 1002．266X(2008)42-0028-02 环腺苷酸反应元件结合蛋白(CREB)是细胞内 增加。排除实验期间死亡的大鼠。造模 2个月后， 环腺苷酸 (cAMP)变化的转录转导因子，具有调节 A、B组每 日给予花生油2ml，C、D组每 日分别给予 基因转录和蛋 白质的合成的作用。磷酸化 CREB 60、120mg／kgNBP(用花生油稀释至2m1)灌冒，连 (p-CREB)是CREB的活性状态。近年研究表明，P— 续 1个月。 CREB在缺血性脑损伤中对神经元有重要的保护作 1．2．2 标本采集 术后3个月，以10％水合氯醛 用 ¨。丁基苯酞 (NBP)是从芹菜籽中提取的左旋 腹腔麻醉，迅速开胸暴露心脏，用生理盐水经左心室 体，经人工合成为消旋体，是治疗脑缺血的新药。目 快速冲洗，断头后取左侧脑，随后部分置人4％多聚 前关于NBP治疗急性脑缺血的研究较多，治疗慢性 甲醛(4℃)固定24h，常规脱水，透明，石蜡包埋，制 脑缺血的研究较少。2006年7月一2007年 7月，我 作冠状面切片，用于免疫组化染色；部分放人超低温 们对慢性脑缺血大鼠海马中p-CREB和CREBmR— 冰箱，用于RT-PCR检测。 NA的表达情况进行检测，进一步观察NBP对其表 1．2．3 检测方法 ①p-CREB检测：采用免疫组化 达的影响，探讨NBP治疗慢性脑缺血的分子机制。 法，按试剂盒说明书操作，DAB显色，苏木素轻度复 1 材料与方法 染、脱水、透明、封片。应用病理图文分析系统进行 1．1 动物与试剂 健康Wistar大鼠80只，雌雄不 结果分析，计数海马CA1、CA3及 DG区p-CREB阳 拘，12～l4月龄，体质量450～550g，由郑州大学实 性细胞数及检测灰度值。②CREBmRNA检测：采 验动物中心提供。p-CREB为兔抗大鼠多克隆抗体 用RT．PCR方法，按试剂盒说明书提取海马总RNA， (北京博奥森公司)，SP免疫组化试剂盒、DAB显色 逆转录合成 eDNA。根据文献报道的CREB序列， 试剂盒(北京中杉试剂公司)；柱式Trizol总RNA抽 设计合成扩增CREBeDNA引物，扩增长度385bp。 提试剂盒(上海生物工程公司)。 反应结束后，取PCR反应液行琼脂糖凝胶 电泳，凝 1．2 方法 胶图像分析仪检测 目标带的光密度OD值。 1．2．1慢性脑缺血模型的制作 采用永久性结扎 1．2．4 统计学方法 应用SPSSI3．0软件进行数据 双侧颈总动脉制作慢性脑缺血模型。将大鼠随机分 处理，结果以 ±s表示，多组间比较采用单因素方 成假手术组 (A组)、单纯缺血组 (B组)、缺血低剂 差分析，用LSD法进行两两比较。P≤0．05为有统