半胱氨酸蛋白酶基因在家蚕杆状病毒表达系统中的表达.pdfVIP

； （） 蚕 业 科 学 24 1 2003 29 3 CANYE KEXUE 半胱氨酸蛋白酶基因在家蚕杆状病毒 表达系统中的表达 ， 1 2 2 1 1 1 1 林旭瑷 李卫国 陈 寅 易咏竹 张志芳 何家禄 1 2 （农业部家蚕生物技术重点开放实验室，中国农业科学院蚕业研究所，镇江 212018； 山东农业大学林学院蚕学系） 摘 要 为了探讨杆状病毒的致病机理、改善杆状病毒表达系统的表达效率，将来源于家蚕核型多角体病毒 株 ZJ8 的半胱氨酸蛋白酶（ ， ）基因克隆到转移载体 上，获得重组转移载体 ，与线性化的 cystenine protease CP pVL 1393 pVL-cp 病毒 共转染家蚕 贴壁细胞。通过蓝白斑筛选、纯化后得到的重组病毒经 鉴定证明， Bm-BacPAK6 DNA Bm-5 PCR cp 基因已被正确导入，注射感染家蚕 龄幼虫 后表达产物活性达到最高。对表达产物进行 及酶活力 5 120 1 SDS 分析，检测到半胱氨酸蛋白酶在家蚕生物反应器中的表达，其表达量约为1 600 U/ mL。 关键词 杆状病毒 半胱氨酸蛋白酶 家蚕生物反应器 表达 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） @78 S881.2 A 0257 - 4799 2003 03 - 0241 - 05 家蚕核型多角体病毒（ 为宿主，通过杆状病毒表达载体系统实现了该酶的 Bombyx mori nucIear poIy- 1edrosis virus， ）作为外源基因表达载体及生 表达。 BmNPV 物杀虫剂得到了广泛的研究。在其基因组DNA 中， 1 材料和方法 存在着半胱氨酸蛋白酶的编码序列，经昆虫细胞基 因功能分析发现：病毒复制后期该酶被表达，存在于 1. 1 材料 病毒的核衣壳和胞膜中，是一种“ 型”的组织蛋白 、大肠杆菌 、 、 L- BmNPV-ZJ8 TG1 pBIuescript SK pVL 、 细胞、供试家蚕品种 均为农业部家 酶，在酸性条件（ ）下活性最高，该酶能专一性 1393