甘薯茎线虫分离方法改进.pdfVIP

第四届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第三届生物农药研讨会 f41张龙翔、张庭芳。生物化学试验方法与技术fMl．北京：高教出版社，1997 [5】天津轻工业学院，大连轻工业学院，无锡轻工大学，等．工业发酵分析【M】．北京：中国轻工业出版社，1986 MV．An methodforthe ofantibiotics 【6]Patel agarplate screening triggeringautolytic enzymes[J]．J 527 【7】俞俊棠，唐孝宣，邬行彦，等．新编生物工艺学(上册)[M1．北京：化学工艺出版社，教材出版中心，2003 (7)：398-400 甘薯茎线虫分离方法的改进 武志朴，杨文香，李亚宁，张汀，刘大群4 (河北农业大学植物病理系，河北省农作物病虫害生物防治工程技术研究中心，河北保定071001) 摘要：本文将分离线虫常用的漏斗分离法和浅盘分离法进行了改进，得到了一种适合防治试验中测定药剂对线虫 击倒率的甘薯茎线虫的分离方法。通过增大分离水体、提高水体中氧气的含量、调整病薯块大小、减小病薯包装、 超声波分散线虫等方法，使线虫成活率、分离量大大提高，解决了线虫分离和保存中的凝集问题。改进后的方法， 一次可得到含两万条以上成活率90％左右的线虫液，而且线虫液分散度和均匀度均良好。 关键词：甘薯：茎线虫；分离方法 甘薯茎线虫病是甘薯生产上危险性病害之一，该病既可在田间直接造成减产，也可造成甘薯的 贮藏期烂窖。在我国山东、河南、河北、吉林和辽宁等地均有严重发生的报道¨{’。河北省仅卢龙县 的甘薯茎线虫病发病面积就为1．4万公顷，约占全县甘薯栽培面积的2／3。重病田如不经过防治则 几乎绝收，即使经防治后仍有70％～80％的发病率，以至于甘薯无法窖存，冬前不得不处理掉全部甘 薯，给我国甘薯生产造成了巨大的损失。 虽然防治甘薯茎线虫病的化学药剂、生物制剂、中药提取物等都在不断地研制中，但很少有涉 及甘薯茎线虫分离方法的报道。甘薯茎线虫击倒率的试验快速简便，是筛选和测定杀线剂的重要方 法，而获得高成活率的线虫液是进行该防治试验的首要条件。常用的分离线虫的浅盘分离法和漏斗 分离法阳1获得的线虫成活率低，往往不能满足上述线虫防治试验的需要。另外，在新鲜病薯中分离 此线虫相对容易，但很难常年都能得到新鲜病薯来满足试验的需要。因此，本文对这些分离方法进 行改进，以获得满足甘薯茎线虫击倒率等防治试验的线虫分离方法，为进行甘薯茎线虫病防治的试 验和研究奠定基础。 1材料与方法 1．1材料 甘薯茎线虫病病薯采于河北省清苑县冉庄。 1．2供试试剂 1．8％507维菌素乳油(购自公主岭市八达农化有限公司)。 1．3方法 1．3．1甘薯茎线虫分离方法的改进 将漏斗分离法、浅盘分离法旧1进行改进，收集甘薯茎线虫，具体步骤如下： 基金项目：河北省科技厅攻关项目(2005-2007) 作者简介：武志$1(1979-)，男，硕士，邢台市林业局，E—mail：wuzhipu@126．com +通讯作者：刘大群，男，教授，电话：0312—7521286，E—mail：ldq@hebau．edu．cn 192 第四届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第三届生物农药研讨会 为分离线虫用水。 2am3(纯净水补入空气24h)的小块，再用水冲洗表面。 3)用长宽20cm的纱布两层包裹切好的待分离的小病薯块，将多包病薯块放入400目筛中。 目筛上缘约lcm，用空气发生器在400目筛中补入空气。 重新使用时补氧24h，若线虫液中有线虫凝集，将线虫液在使用前边补氧边使用超声波清洗器 后，冲入高压灭菌的三角瓶中，然后补入适量的无菌水同时将线虫液浓度调节为试验所需浓度。 1．3．2超声波处理 如果线虫有凝集问题，则将分离好的线虫液，在使用前边补氧边使用超声波清洗器，超声处理 5s、lOs、15s、20s、25s、30s。连续补氧两小时后备用。 2结果与分析 2．1甘薯茎线虫分离方法的改进 漏斗分离法和浅盘分离法操作简便，是目前从植物材料中分离线虫的较好的方法。但这两种分 离法中，只能盛放少量病薯，分离出的线虫就相对