可同时检测齿舌兰轮斑及蕙兰嵌纹病毒之双特异性多元抗体之制备与应用.pdfVIP

16 2009年海峡两岸植物病理学术研讨会 可同时检测齿舌兰轮斑及蕙兰嵌纹病毒之双特异性多元抗体之制备 与应用 张清安 台中县雾峰乡朝阳科技大学生化科技研究所，电子邮件cachang@cyut．edu．tW virus，ORSV)及蕙兰嵌纹病毒 齿舌兰轮斑病毒(Odontoglossumringspot mosaic (Cymbidiumvirus，CymMV)乃发生最普遍也最受国际兰花产业关切的两 种病毒。兰花种苗生产过程中必须将此二病毒列为例行检测对象，以确保所繁 殖之种苗能免于感染。虽然近年来分子检测技术如RT-PCR、生物芯片及realtime PCR等均已被广泛应用，但因成本及设备需求较高，目前兰花产业界的病毒检 种专一性抗体进行检测，但若能研发可同时侦测ORSV及CymMV二种病毒 之抗血清，将可节省时间、材料及人工，提升检测效率。本研究室已成功应用 重组蛋白技术将ORSV及CymMV之鞘蛋白基因之部分片段构筑成为六种不同 组合之单一重组蛋白，并藉由细菌表达系统大量纯化制备。试验发现此等重组 蛋白均可与两病毒之多元抗体反应，证实的确同时具备两病毒之抗原性。所制 备之多元抗体可应用于indirect 并以RT．PCR对检测结果具争议性之样品进行再确认。结果显示六种双特异性 N端及ORSV 重组蛋白抗体中，以具有CymMV C端所构筑产生之Anti．CyOrN 在本研究三次重复试验中表现效果最好，其中代表正确检测出感病样品的灵敏 度达99％；而代表正确确定非感染样品的专一性则高达100％。其他四种利用二 个N端或二个C端所构筑之双特异性重组蛋白抗体之检测结果在专一性上均有 不错之表现，在灵敏度上则与传统单专一性抗体有1～2％的差异。此结果证实 利用CymMV及ORSV鞘蛋白基因部分序列构筑重组蛋白可制备出具有双特异 性之抗体，此等抗体在indirect blotting 等免疫侦测技术上已具有实际应用之价值。本研究迸一步探讨应用此类具有双 特异性之重组蛋白抗体于免疫捕捉反转录聚合酶连锁反应 性。重组蛋白抗体在IC．RT．PCR之应用不如混和两种单特异性抗体之效果，其 原因可能在于此两类型抗体与完整病毒颗粒之亲和性有所差异。