TTF-1相关蛋白26磷酸化位点对人SP—B基因表达的影响.pdfVIP

维普资讯 第 36卷第6期第 707页 华 中科技大学学报 (医学版) Vo1．36 No．6 P．707 2007年 l2月 ActaMedUnivSciTechnolHuazhong Dec． 2007 TTF一1相关蛋 白26磷酸化位点 对人 SP—B基因表达的影响 柴新群 邓飞涛 △ 华 中科技大学 同济医学院附属协和医院 肝胆外科 z妇产科 ，武汉 430022 摘要 目的 探讨 甲状腺转录 因子一1相关蛋 白26(TAP26)对人肺表面活性蛋 白一B(hSP—B)基 因表达 的调控机制 。 方法 采用定点诱变PCR技术，分别突变掉TAP26的4个磷酸化位点(s”， ，T 和T“Ss)，并获得TAP26的4个 相应突变体；通过体外细胞共转染和荧光素酶报告基因活性值检测技术分别检测上述 4个突变体对 hSP—B基因启动子 活性的影响。结果 与野生型TAP26比较，突变体质粒 TAP26(T“S“。一v“A“。)、TAP26(S”一As)和TAP26(Tz19 一V 。)分别与 hSP-B基因启动子共转染后所测荧光素酶活性值无 明显差异 (PO．05)；而当DNA浓度为 400ng的突 变体质粒 TAP26(S 一A )与hSP—B基因启动子共转染后所测荧光素酶活性值则明显降低 (PO．05)。结论 突变体 质粒 TAP26(S6一A“)不能促进 hSP—B的表达 ，从而 TAP26的 蛋 白激酶 C(PKC)位点是 TAP26移位到细胞核的重 要部位 。 关键词 甲状腺转录因子一1相关蛋 白26； 肺表面活性蛋 白一B； 基 因调节 中图法分 类号 Q344 ．14 EffectofthePhosphorylationSitesoftheThyroidTranscriptionFactor-1 Associated Protein26onSurfactantProtein-B Expression ChaiXinqun 。DengFeitao△ DepartmentofHepatobiliarySurgery，DepartmentofObstetricsandGynecology，UnionHospital。 Tong|iMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430022 Abstract 0bjective Toinvestigatetheregulatoryeffectsofthyroidtranscriptionfactor-1associatedprotein26(T．’P26) ontheexpressionofhumansurfactantprotein-B (hSP—B)gene．M ethods Site-directedmutagenesisPCR wasemployedtoe— liminate4phosphorylationsites(S惦，s6，T 。andT S 。)ofTAP26respectivelyandproduce4mutants．Co-transfection studyandluciferaseactivitymeasurementwereperformedtOassaytheeffectsof4mutantsonthehSP—Bgeneexpression．Re— sulIs LuciferaseactivitymeasurementresultsshowedthatafterCO—transfectionofthreemutantsoftheTAP26(T S 0—．．V A 。)，TAP26 (S 。—．．A 。)andTAP26 (T 。—．．V 。)plasmidrespect