非标记液质联用蛋白组分析中国实验小型猪冠心病模型方法研究.pdfVIP

2013年《药物分析杂志》优秀论文评选交流会论文集 ．．——141．-—— 3．2药效成分的定量分析本文建立的LC—MS／MS分析方法可以对目标化合物同时进行定性及定量分 析。由于莨菪碱和阿托品为对映异构体存于天仙子内，一般液相色谱条件下无法分离，分别进行定量分析， 304／138及m／z290／124可分别对东 所以只能以总莨菪碱计算。本文通过仪器条件设定，利用正离子对m／z 莨菪碱和莨菪碱／阿托品进行定量分析，且分析快速，东莨菪碱和莨菪碱／阿托品的保留时间分别为6min和 8 同产地的天仙子样本进行分析，测出其东莨菪碱及茛菪碱／阿托品含量见表2(表略)。 参考文献(略) (本文发表于《药物分析杂志)2012．32(4)：599) 非标记液质联用蛋白组分析中国实验小型猪冠心病模型的方法研究 苗兰1，孙明谦1，林雪2，曹进1，刘屏3，林成仁1，刘建勋1 (1．中国中医科学院西苑医院实验中心，北京100091；2．北京协和医院心内科，北京100730； 3．临床药理研究所，中国人民解放军总医院，北京，100853) 摘要目的：针对中国实验小型猪冠心病模型，建立非标记液相色谱／质谱联用血清蛋白组学研究方法。方法：研究中分别设 立健康对照组、模型组、阳性药物治疗组及中药治疗组，分析过程中，样品未进行高丰度蛋白去除，利用BCA法测定蛋白浓度 后，直接使用一20℃冷丙酮冰上沉淀，4℃放置过夜，离心，弃去溶液，对蛋白沉淀，分两步加入Trypsin进行酶解处理，加酸终 止后，离心，获取上清液进行分析。测定方法采用160nl amx75 Trap柱进行蛋白富集，分析柱采用AgilentChip(Cml50 Ixm)，为获得较高的蛋白覆盖率，方法进行了如下优化：测定梯度优化在97％水相一77％水相区间；线性梯度运行时间为125 min；Datadependent参数优化；2次重复进样等。测定结果利用AgilentSpectralmill进行搜索，部分蛋白利用Mascot进行了验 证搜索。结果：最终在健康对照组获得特异性蛋白512个(unique 异性蛋白为参照，对4组来源样品进行了PCA分析，将上述各组进行分类，其中模型组与治疗组得到了明显的区分，中药治疗 组与阳性药组有着相似的变化轨迹，但与健康组区分明显，这说明实验中大部分冠心病的损伤存在很大程度的不可逆性，药 物治疗仅对其中部分蛋白有着转归趋势，例如对其中纤维蛋白原，有着明显的下调趋势。研究还针对主要的蛋白进行了功能 分类，相对识别了模型组与健康组、模型组与治疗组；治疗组与健康组之间的蛋白上调及下调趋势，其功能主要集中在脂质代 的变化，同时可以在一定程度上反映出治疗的转归方向。 关键词：中国实验小型猪；蛋白组学；冠心病；非标记液相色谱／质谱联用 Method oflabelfreeLC／MS onChinesemini exploration proteomics model、耐th heartdisease pig experimentalcoronary MIAO Lanl，SUNMing—qianl，LINXue2， CAO Jian—xunl Jinl，LIU Pin93，LINCheng—Renl，LIU ofChineseMedical (1．ResearchCentra，XiyuanHospital，ChinaAcademy Sciences，Beijing100091，Chi