miR-466a在转基因小鼠中过表达诱发了类似于人类尿崩症(diabetes+insipidus)表现型.pdfVIP

212 华东地区第十二届实验动物科学学术交流会 mi R-466a在转基因小鼠中的过表达诱发了类似于人类尿崩症 (di abetesi nsi i P dus)的表现型 5,1颖1，罗羽3王涛1，丁凤1，一，杨云青1，2+ 1厦门大学应激细胞生物学国家重点实验室和生命科学学院生物医学科学系，厦门361005；2福建省转基因与基因敲除小鼠 培育与研究共用技术服务平台，厦门361005；3第三军医大学护理学院，重庆400038 et Acids [摘要]目的生物信息学分析和我们的前期研究(Huanga』．，NucJeic 可能可以在肾髓质中对渗透调 示，miR一466a／b／c／e一3p分别具几乎完全相同的成熟microRNA序列， 控转录因子删伽刚巧进行转录后表达调控。我们因此研究了miR一466a在转基因小鼠中的过表达 对小鼠肾组织删砌刚巧的表达和小鼠尿液浓缩机制的影响。方法通过PCR从鼠基因组中扩增 miR一466a基因序列，将片段插入鸡B．actin 转基因片段酶切出来用于显微注射受精卵制备FVB遗传背景的转基因小鼠。小鼠基因型鉴定通过剪尾 巴提取基因组DNA进行PCR分析。通过Real一timeImPCR或Western 中钠离子、钾离子、氯离子、尿素、肌酸酐等溶质含量。尿浓缩能力是采用对雄性8周龄wT和 液以分析尿液渗透压变化。结果我们已成功制备两个品系的miR．466a转基因小鼠(这是福建省内机 构首次成功制备的具独立知识产权的转基因小鼠)。Real．timeRT-PCR分析发现其中一个品系 后的miR一466a川g小鼠的尿液渗透压均较相应的wT对照小鼠低约500 的过表达显著抑制了渗透调控转录因子嘶嬲P伽劂巧及其靶基因的表达，从而显著影响了小鼠的尿液 浓缩机制。miR．466a／b／c／e一5p／3p因而是一组肾渗透调控和尿液浓缩机制的重要调控基因。 [关键词]miR一466a，OREBP／NFAT5，转基因小鼠；尿崩症 Pf 达量可以使渗透调控转录因子伽黜乃VFAY5的表达量上调(Huanga』，2011)。在小鼠肾脏外髓集合管 上皮细胞(mIMC03)培养过程中我们发)见NaGl高渗处理细胞2 miR-467b*and miR一467a*／d*全部来源于Sfmbt2的同一个内含子。 华东地区第十二届实验动物科学学术交流会 213 船 暮盏t dc自；E 工¨¨u ^t，{-_，=q簟c几¨U． 8n；l九¨U^ n¨U． S1．n¨U 黼●___■鲁{； 吼而H¨u茁芒； 饿工¨¨u舟±¨．1． 0；2{ ‘_■{{ ^l—S{ f—¨U女口三； Ic¨u§．{ ‘●#l —．■蒜蓝t I．■d￡li ．_■g：； n¨U‘ 皇l_警．n¨¨u ．q*2暮门¨¨]_ #，{几U=互一￡n¨¨U n}{n¨U ●}*{{ l_●：§{ ．nU节口鬲圣E 言Rto门¨¨¨¨¨u ．1刈●qJ]¨●叫，¨