Twist1增强基质金属蛋白酶活性促进肝癌转移.pdfVIP

中华医学会病理学分会2010年学术年会论文汇编 大会发言 A-22 Twistl增强基质金属蛋白酶活性促进肝癌转移 孙保存，赵秀兰，孙涛。车娜，孙丹，赵楠，董学易。古强 天津医科大学病理教研室300070 transition，EMT)与肿瘤侵袭和 摘要上皮一间充质转变(Epthithelial—mesenchymal (Hepatocellularcarcinoma，HCC)侵袭和转移的作用和机制目前尚不明了。本研究通过 上调HCC表达Twistl和Twist2，利用WesternBlot、明胶酶谱和细胞功能实验分析Twistl 和Twist2对HCC侵袭、运动能力的影响；利用免疫组织化学分析97例人类HCC临床病理 可以促进肿瘤细胞的迁移、侵袭能力，同时增强MMPs的活性，而Twist2则无此功能：临 床病例分析结果表明Twistl与HCC转移预后有关，与MMPs表达存在相关性。研究结果提 可以通过激活删Ps促进肿瘤细胞迁移、运动，进而促进HCC转移并影响预后。本研究从肿 瘤转移角度，提出了Twist蛋白不同亚型可能具有不同的生物学功能，作为一种新的药物 靶点对抗肿瘤转移治疗具有重要意义。 肝癌在世界发病率位居第五，在中国位居第三。作为一种生长快速的肿瘤类型。肝癌 细胞可以通过侵袭血管获得转移机会，并导致病人预后不良【l。2】。肝癌术后，约有5096 的病人发生转移或复发，多表现为肝内复发。肝外转移多侵犯肺、骨和淋巴结【3，4l。为 了进一步了解HCC转移的机制，其细胞和分子生物学特征是非常重要的。 EMT是目前公认的肿瘤侵袭转移的机制之一，其主要导致肿瘤细胞塑形。表现为细胞 之间粘附分子，如E-cadherin的表达缺失，细胞去极化；同时出现间充质细胞相关标志分 子Vimentin等分子的表达，细胞获得运动能力。细胞发生EMT主要受局部微环境和细胞之 间相互作用所诱导，有助于细胞群体获得生存机会【9，10】。EMT调控因子包括锌指蛋白 瘤相关EMT方面颇受关注，尤其是Twist在乳腺癌、前列腺癌等多种肿瘤的侵袭转移中充 的作用目前尚不清晰，本研究采用HCC细胞系为体外模型，通过过表达Twistl和Twist2 观察其对细胞运动、侵袭能力的影响。通过对97例HCC病理标本进行临床病理分析，观察 Twistl和Twist2与HCC临床病例资料之间的关联性，以期基于体内、体外研究结果了解 Twist不同亚型在HCC侵袭转移中的作用，及其与侵袋相关的MMPs之间的关联性。 1．材料与方法 1．1病理资料收集HCC病理组织标本97例，为天津医科大学肿瘤医院、天津医科大学 总医院2001’2005年期间无化疗术后病理石蜡标本，随访资料完全，病人知情同意。临床 病理诊断经2名主任医师复诊，临床资料收集包括年龄、性别、病理分级、临床分期和生 存时间。 1．2免疫组织化学石蜡切片经常规切片、脱蜡至水，3％双氧水去除内源过氧化物酶活 ．99． 大会发言 中华医学会病理学分会2010年学术年会论文汇编 性，微波修复；抗体稀释液稀释一抗(Santacruz，稀释度1：100’l：200)4℃孵育过夜， 二抗系统采用PV6000试剂盒(北京中衫)孵育，DAB显色，显微拍照。 DMEM高糖培养基，添加10％胎牛血清，37℃、5％C02恒湿条件下培养至80％融合。 st2 (5’吼ACAACGGCCGGAACTTTAG-3’ 试剂盒)，采用PEI转染法(Polyscience)，转染效率过低则采用G418富集阳性细胞． 1．5Western Blot收获细胞，以含有蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液裂解细胞，8％聚丙烯 过夜，l：400稀释一抗并37℃孵育2h，辣根过氧物酶标记二抗37℃孵育2h，增强化学发 光法曝光(ECL，罗氏)，凝胶分析软件确定相对灰度值。 ll 1．6细胞侵袭实验采用8 介质为Matrigel(肋)，下室以20％FBS趋化，侵袭实验处理