植物细胞、组织和器官培养33157-162页,1993年.doc

植物细胞、组织和器官培养33：157-162页，1993年 克卢沃（Kluwer）学术出版社，印刷于荷兰 在有活性炭存在的情况下，植物组织培养基在6-苯甲酸嘌呤和2,4-二氯苯氧乙酸酸性浓度时的变化 A. Ebert, F. Taylor Jennet Blake 伦敦大学崴学院（Wye College）园艺系高级繁殖系统小组,英国肯特郡阿什福德区 怀TN25 5AH(现地址:菲律宾椰子管理局阿尔拜省研究中心,菲律宾阿尔拜省Guinobatan市Banao街4503号) 1991年12月16日接受,1992年11月13日完成修订 关键词:活性炭，BAP吸附作用，2,4-D吸附作用，椰子树，组织培养 摘要 6-苯甲酸嘌呤(BAP)、2,4-二氯苯氧基乙酸(2,4-D)的液态和半固态组织培养基中活性炭(AC)的 吸附率是由使用8-[14C]-BAP and 2-[14C]-2,4-D来决定的。因为不管是液态的还是半固态培养 基其自由BAP实质上是固定的比率：配制培养基后的5到10天内即可得到AC-绑定的BAP。 无论是最初的BAP或2,4- D的水平，或均提高到5×10-4 M时，培养基中可用的2,4-D级别 就会发生明显的增长。当2,4-D级达到5 x 10 -4 M时，则培养基中的蔗糖成分导致可用的2,4-D 显著增加。反之，复合了常量和微量营养素的包含物明显降低培养基中自由2,4-D的可用性。 缩略词：AC--活性炭，BAP--6-苯甲酸嘌呤，2,4-D--2,4-二氯苯氧基乙酸 前言 植物组织培养中使用活性炭(AC)已经为许多实验室所采纳。通常，植物组织良好长势与 培养基中添加活性炭密切相关（昂纳格诺斯蒂克斯，1974年；弗里德贝格和埃里克森，1975 年；霍纳等人，1977年；约翰逊和埃里克森，1977年；韦瑟黑德等人，1978年；佩克和卡 明，1986年；邦等人，1988年；文卡特斯瓦兰等人，1988年；塞赫迈特和托雷洛，1988 年）。活性炭的有益作用归因于从培养基中去除了抑制物质，要么是通过对培养基高压灭菌 产生（韦瑟黑德等人，1978年）或者是由组织本身产生（弗里德贝格等人，1978年）。通过其吸附能力，活性炭可以减少2,4-D高级别的毒性作用（塞赫迈特和托雷洛，1988年）， 还可以减少培养基中的吲哚丁酸（米松等人，1983年）。不利的方面是，活性炭对植物生长 素和细胞分裂素的吸附作用会使这些基本的物质失去活性，达不到组织培养的要求（韦瑟黑德等人，1978年）。 在活性炭存在的情况下，对组织培养基中生长调节剂的实际浓度缺乏精确的数据是确定 生长调节剂理想添加量的主要障碍。这也是困扰崴学院（Wye College）组织培养实验室关于 椰子克隆繁殖研究的一个问题。 最近，通过使用放射指示剂研究发现，2,4-D通过活性炭的吸附率根据培养基的状态（液态/半固态），活性炭和2,4-D的浓度，pH值和温度的变化而改变（埃伯特和泰勒，1990年）。 特别是半固态培养基，研究发现，可用的2,4-D的变化在配制培养基后一直在进行，可长达 20天。通过对椰树的试管组织培养发现，它们的生长反应根据所用培养基的时长和2,4-D浓 度可能相关的变化而有明显的不同（埃伯特和泰勒，1990年）。 我们需要对这些发现进行调查研究，以确定对培养基进一步添加不同的BAP浓度是否 干扰了2,4-D由AC正常的吸附方式。而且有必要说明放射性BAP的吸附率是多少。这些调 查研究的结果连同液态培养基2,4-D吸附作用对其它成分的影响信息要一起公布。 目前已公布的基础研究和以前埃伯特与泰勒（1990）关于2,4-D和BAP由AC吸附水平 的论文现在正在这家实验室通过使用放射性示踪物连同椰子的花序外植体一起进行研究论证。 材料和方法 配制培养基 AC被分散在水热凝胶中（植物凝胶，西格马，或Oxoid公司的技术琼脂），以得到2.5g1-1AC 和3gl-1植物凝胶或 6gl-1 技术琼脂的最终浓度。正如埃伯特和泰勒（1990）所详述的那样， 用作椰树试管培养的营养培养基要单独配制。 至于半固态培养基的配制，将双倍浓度的营养培养基等分成若干份(5ml)，分别装进不同的平底玻璃管中，然后把等体积的双倍浓度热凝胶连同AC悬浮液添加入玻璃管，同时轻 轻的搅动。高压灭菌后，培养基可以花整夜的时间冷却。经过这些过程后，炭就会沉淀在管 子的底部。液态培养基采用同样的配制过程，除了往培养管中添加营养培养基之前，AC是 被分散在热水中的。对于液态和凝胶培养基，要准备三个配置了AC的可重复处理的试管以 及相同数量的无AC试管作为无AC控制。 没有被AC吸附BAP的百分比 如图：1、配置后，对液态(a)、技术琼脂(b)和植物凝胶(c)培养基中BAP由AC(2.5gl -