基于膜形变产生牵张力作用下间充质干细胞行为研究.pdfVIP

2010年微纳尺度分离和分析技术学术会议暨第六届全国微全分析学术会议 基于膜形变产生的牵张力作用下间充质干细胞行为研究 * * 高兴华 张旭 林炳承 秦建华 中国科学院大连化学物理研究所 大连 116023 1 引言 间充质干细胞是一种具有自我复制能力和多向分化潜能的成体干细胞，属于非终末分化 细胞，在体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨和软骨等多种组织细胞 [1] 。由于间充质 干细胞具有多系分化能力，而且来源相对广泛也较容易提取纯化、体外扩增，所以成为组织 工程中重要的“种子”细胞，被广泛应用于损伤修复与再生移植中[2]。出于组织工程等的研 究需要，研究间充质干细胞受机械力学刺激后细胞行为的变化成为一个重要的课题。在众多 机械力学刺激中，牵张力、流体剪切力、压缩力等由于同体内生理环境（如微循环、关节、 [3] 肌肉组织等）接近而被关注 。 近年，随着微加工技术的不断发展，利用微流控芯片技术研究细胞受力成为可能。本研 究中我们利用 PDMS 膜在气体驱动下发生弹性形变来产生牵张力，借此来研究间充质干细 胞在微小力学作用下细胞增殖、成骨、成脂肪分化等方面的变化情况。 2 实验方法(略) 3 结果与讨论 3.1 芯片设计与膜形变分析 利用 PDMS 软刻蚀技术及微泵阀夹膜制作原理，设计并制造了一种多通道的夹膜芯片。 该芯片分为三层，上层为细胞流体通道，用以细胞的接种与培养；下层为气体控制通道，用 以提供膜形变所需要的负压；中间为 PDMS 膜层，用以实现细胞受力。 图1 芯片设计与膜形变测定 图2 间充质干细胞在牵张力作用下细胞增殖情况 A：芯片布局图；B：膜形变与细胞受力示 A：细胞在不同大小牵张力作用下的荧光照片；B：细胞 意图；C：膜形变测量与软件模拟图 受力1天后的增殖情况；C：细胞受力3天后的增殖情况 该芯片利用通道宽度尺寸的改变在相同压力作用下产生不同的形变而在同一块芯片上 同时得到了五种不同大小的牵张力，并将其划分为低（2.2%)、中（2.2%-3.5%）、高 （ 3.5%） 三种程度。 2010年微纳尺度分离和分析技术学术会议暨第六届全国微全分析学术会议 3.2 间充质对间充质干细胞增殖的影响 以小鼠骨髓间充质干细胞为研究对象施加力学刺激观察其存活与增殖情况，结果表明细 胞可在该种力学刺激下正常存活并增殖，其中较高力学刺激有明显的促进细胞增殖的情况， 而较低的、中等强度的力学刺激对细胞增殖无明显影响。其结果如图 2 所示。 3.3 牵张力对间充质干细胞分化的影响 在未施加任何化学诱导分化剂的情况下，细胞每天接受力学刺激 7天后进行成骨标记物 碱性磷酸酶（ALP）染色，结果表明在中等及较高力学刺激下间充质干细胞出现明显的成骨 分化情况（结果如图 3 所示）。这说明牵张力可诱导间充质干细胞成骨分化且分化程度同力 学强度有关。 此外，在施加成骨化学诱导分化剂的实验组中同样也观察到较高的力学刺激下 ALP的表 达更明显。而在添加了成脂肪分化剂的实验组中，脂肪油滴的含量则呈减少的趋势。这说明 较大的牵张力可促进骨的形成而抑制脂肪的产生。结果如图 4 所示。 图3间充质干细胞在只受牵张力影响下细胞成骨情况 图4 间充质干细胞在牵张力与分化剂作用下细胞分化情况 A：不同程度牵张里作用下AIP染色照片； A：成骨分化ALP染色结果； B：间充质干细胞ALP成骨染色数据结果 B：成脂肪分化油红染色结果 4 结论 设计并制造了一种利用脉冲负压致使 PDMS 膜周期性弹性形变产生牵张力的微流控芯 片，并以此研究了在不同程度牵张力下间充质干细胞的增殖与分化。结果表明较高强度的牵 张力可促进间充质干