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* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * cDNA 5′ （5′RACE 法） 端的快速扩增法 (RACE: Rapid Amplification of cDNA Ends) 目 的 扩增5′端未知的 基因（DNA）序列 报 告 内 容 ● 使用试剂与方法 ● 实 验 例 实验使用的主要试剂 TaKaRa 5′ TaKaRa LA Taq 酶 5条DNA扩增用引物 切胶回收试剂盒 -Full RACE Core Set ●Self-Ligation 法 5 ’ RACE原理 5’ RACE 的实验方法 反转录（RT）反应。 Hybrid RNA的分解。 单链cDNA的自身连接。 PCR扩增5’未知区域。 目的DNA片段的切胶回收。 DNA序列测定。 体外转录PSPtet RNA。 配制PSPtet RNA和人总RNA的混合样品。 设计合成5条引物。 使用5’ RACE法获取PSPtet RNA的5’末端。 切胶回收目的DNA片段。 进行DNA测序确认序列结果。 （获取PSPtet RNA的5’末端） 实 验 例 PSPtet RNA 体外转录 PSPtet RNA的电泳结果 1 ：PSPtet RNA M：DL2,000 Marker 1 M RNA Mixture 的配制 将PSPtet RNA与人总RNA按1 ：105 的比例混合，此混 合物用于5’ RACE实验。 人总 RNA的电泳结果 1 M 1 : Human Total RNA M :λHind III Marker PSPtet RNA的5’端序列 AATACAAGCTTGGGCTGCAGGTCAATTCTCATGTTTGACAGCTTATCATCGATAAGCTTTAATGCGGTAGTTTATCACAGTTAAATTGCTAACGCAGTCAGGCACCGTGTATGAAATCTAACAATGCGCTCATCGTCATCCTCGGCACCGTCACCCTGGATGCTGTAGGCATAGGCTTGGTTATGCCGGTACTGCCGGGCCTCTTGCGGGATATCGTCCATTCCGACAGCATCGCCAGTCACTATGGCGTGCTGCTAGCGCTATATGCGTGATGCAATTTCTATGCGCACCCGTTCTCGGAGCACTGTCCGACCGCTTTGGCCGCCGCCCAGTCCTGCTCGCTTCGCTACTTGGAGCCACTATCGACTACGCGATCATGGCGACCACACCCGTCCTGTGGATCCTCTACGCCGGACGCATCGTGGCCGGCATCACCGGCGCCACAGGTGCGGTTGCTGGCGCCTATATCGCCGACATCACCGATGGGGAAGATCGGGCTCGCCACTTCGGGCTCATGAGCGCTTGTTTCGGCGTGGGTATGGTGGCAGGCCCCGTGGCCGGGGGACTGTTGGGCGCCATCTCCTTGCATGCACCATTCCTTGCGGCGGCGGTGCTCAACGGCCTCAACCTACTACTGGGCTGCTTCCTAATGCAGGAGTCGCATAAGGGAGAGCGTCGACCGATGCCCTTGAGAGCCTTCAACCCAGTCAGCTCCTTCCGGTGGGCGCGGGGCATGACTATCGTCGCCGCACTTATGACTGTCTTCTTTATCATGCAACTCGTAGGACAGGTGCCGGCAGCGCCTCTGGGTCATTTTCGGCGAGGACCGCTTTCGCTGGAGCGCGACGATGATCGGCCTGTCGCTTGCGGTATTCGGAATCTTGCACGCCCTCGCTCAAGCCTTCGTCACTGGTCCCGCCACCAAACGTTTCGGCGAGAAGCAGGCCATTAT··········· 五条引物与PSPtet RNA的位置关系图 未知 序列 5’ 3’ 5条引物的详细序列 RT Primer： 5’-(p)AAAATGACCCAG- 3’ F1 Primer： 5’-GTCCTGTGGATCCTCTACGC- 3’ R1 Primer： 5’-AGCCACTATCGACTACGCGAT- 3’ F2 Primer： 5’-AGCGCTTGTTTCGGCGTGGGTATGGTG- 3’ R2 Primer： 5’-CTGGCGATGCTGTCGGAATGGACGATA- 3’ 体外转录PSPtet RNA。 配制PSPtet RNA和人总