植物病原真菌无毒基因的研究进展.pdfVIP

162 植物保护与现代农业 植物病原真菌无毒基因研究进展‘ 徐志段霞瑜”周益林 (中国农业科学院植物保护研究所国家病虫害生物学重点实验室，北京100094) 摘要：分子生物学技术的飞速发展及其在分子植物病理学中的应用，不仅为植物抗病 基因的研究奠定了基础，也为病原茵无毒基因的克隆提供了有力的技术保障。番茄叶霉菌、 水稻稻瘟菌、大麦云纹茵等植物致病真菌无毒基因的克隆，有利于病原茵与寄主植物相互作 用的研究．进而为制定更为有效的病害防治措施提供有力依据。本文针对植物病原真菌无毒 基因的克隆策略，已经克隆得到的无毒基因及其结构与功能，以及克隆前景进行了综述。 关键词：植物病原真菌；图位克隆；分子标记；无毒基因 l 前言 国以民为本，民以食为天。各种农作物在人类健康方面扮演着极其重要的角色，随着 人民生活水平的提高，人们不再满足于吃饱，更注重饮食的营养与品质，因此对农作物及 其产品的质量也提出了更高的要求。为了保证农产品原料的营养与品质，对农业生产造成 严重为害的各种病、虫、草、鼠害等的防治工作也成为一项艰巨的任务。其中植物真菌性 病害，占植物病害的70％一80％，为害严重。 防治植物病害的主要措施，而当前抗病品种的抗病性丧失过快成为了抗病育种的一个难 题。用抗病品种来防治病原菌时，寄主抗病性的表现不仅取决于品种本身的抗病基因型， 还取决于病原菌的基因型。只有在病原菌无毒基因直接或间接编码的激发子与植物抗病基 因编码的受体相互作用下，植物才会表现出抗性反应，也就是Flor基因对基因学说的内 容。只有几种例外是不遵循Flor所描述的抗性基因和无毒基因的遗传，如：①抗性和无 毒性的隐性遗传；②由两个基因控制的抗性；③由修饰基因或抑制基因额外控制的抗性 et (Barrett，1985；Christa1．，1987)。目前，从植物病原细菌、真菌、病毒和卵菌中都发 现存在与相应的寄主植物抗病基因互作的无毒基因。因此，研究病原菌无毒基因及其编码 产物的结构和功能，不仅有助于了解病原物与植物在分子水平上的互作机制，更为植物抗 病育种工作提供了新途径。病原物无毒基因的研究正日益受到人们的关注。 与植物的抗病基因相比，植物病原物无毒基因的研究进展缓慢，主要是由于在已经克 隆得到的病原物无毒基因之间，尚未发现共有的同源序列或保守性很高的序列，而且目前 已克隆的无毒基因有许多尚未获得其编码的蛋白质产物。但随着分子生物学技术的飞速发 展，已经有很多方法应用于无毒基因的克隆。 作者简介：徐志(198l一)，男，在读硕士生，主要从事分子植物病理学研究 ··通讯作者：博士，研究员，博士生导师，E·mail．xyduan@ippcaas．ell 研究论文 163 目前，克隆基因的途径有两种：正向遗传学(forward genetics)途径。前者是根据目的基因所表现的功能为基础，通过鉴定其产物或某种表型 突变而进行克隆；后者则依据基因本身，通过特定的序列或在基因组中的位置进行克隆。 由于绝大多数病原菌无毒基因的生化性质与功能目前尚未确定，主要是通过基于反向遗传 学建立的物理图谱进行图位克隆和利用插入突变法克隆这类无毒基因。 本文所针对的是真菌的无毒基因，到目前为止只克隆到少数几种真菌的一些无毒基 因。本文综述了目前克隆到的致病真菌无毒基因及其结构和可能的功能。 2 已经克隆的致病真菌无毒基因及其结构和可能的功能 2．1 番茄叶霉菌无毒基因及其功能 真菌无毒基因研究最广泛的是叶霉菌的无毒基因。对感染叶霉菌的番茄叶片质外体的分 4种胞外蛋白ECPl、ECP2、ECI4、ECl5。 基因Avr2，该方法基于多数无毒基因产物在含相应抗病基因的寄主中产生抗性反应的思 些已经含有与植物抗病基因互补无毒基因的PVX接种部位产生抗性反应，从而获得相应 无毒基因克隆。Avr2编码产物为78个氨基酸，富含半胱氨酸及20个氨基酸的信号肽。含 有不同开放阅读框的Avr2基因的菌株对含有Gf-2番茄是致病的。 激发子蛋白，前体为135个氨基酸，经过植物和真菌蛋白酶类的加工后形成86个氨基酸 et 的成熟蛋白(Joostena1．，1997)。Avr4激发子蛋白含有8个作