牙龈卟啉单胞菌PG0839基因对口腔上皮细胞产生炎症因子影响研究.pdfVIP

·382- 第十届全国微生态学学术会议 牙龈卟啉单胞菌PG0839基因对13腔上皮细胞 产生炎症因子的影响研究 刘静波潘亚萍’ 林莉 李琛 中国医科大学口腔医学院 变菌株。本次研究拟对PG0839基因对口腔上皮细胞产生炎症因子的影响进行研究，为进一步明确毒力岛基因 细胞，命名为实验组1；使用PG0839基因突变茵株感染KB细胞，命名为实验组2；对照组为未受细茵感染的KB细 h、12h和24 胞。将细菌与KB细胞共同孵育24h，分别在0．5h、2h、6 h时，提取细胞RNA。应用白细胞介素一 lB(interleukin—l，IL一113)、IL一6、ToU样受体一4(ToUlike 行比较。结果：当细菌和细胞共同孵育2h和6h时，实验组2的IL一113mRNA表达水平显著低于实验组l(2h：t h和6 =3．69，P0．05；6h：t=3．00，P0．05)。在0．5h时，实验组2的1．LR一4mRNA表达水平显著低于实验 组2(0．5h：t=5．269，P0．05；6h：t=3．00，P0．05)。两实验组和对照组IL—l B和TLR一4mRNA与B—ac— tin 内，两实验组的IL一6mRNA表达水平与对照组相近。各组间IL一6mRNA与B—actinmRNA灰度值的比值之间存在 发KB细胞炎症过程中发挥作用。 P．gingivalis是与牙周炎密切相关的红色复合体中的重要成员，与牙周临床指数紧密相关，被认 为是毒力最强的牙周致病菌之一。以往研究表明，P．gingivalis在慢性牙周炎、侵袭性牙周炎、牙周 脓肿、牙髓感染等口腔疾病的发生发展过程中发挥重要作用。毒力岛编码许多不同功能的毒力相关 慢性牙周炎患者的临床牙周指数之间存在着显著性的统计学意义，因此该基因的失活可能对P．gin— givalis的某些生物学特性甚至毒力作用产生影响。本课题组运用等位基因同源重组技术成功构建了 PG0839基因突变菌株。口腔上皮细胞是宿主防御的一道天然屏障。牙龈卟啉单胞菌刺激口腔上皮细 胞，激活该细胞内多种信号传导途径，可通过某些细胞因子的合成和分泌减少等机制造成该细胞功 能紊乱。本实验针对PG0839基因对口腔上皮细胞产生炎症因子的影响进行研究，为进一步明确毒力 岛基因PG0839的功能提供实验依据。 材料和方法 一、实验材料 1．主要试剂、仪器 BHI培养基(Difco (Sanyo，13本)，自动凝胶成像分析仪(GDS8000，UVP公司，美国) 2．实验菌株和细胞株的选择 W83由 W83一PG0839菌株 美国佛罗里达大学牙科学院口腔微生物研究所LamontRJ教授惠赠，P．gingivalis 论文集 ·383· 由构建。 本次研究采用的人口腔上皮KB细胞ATCCCCL217由武汉大学中国典型培养物保藏中心提供。 二、实验方法 1．菌株培养 分别使用BHI固体培养基(添加氯化血红素、维生素K和无菌脱纤维羊血)和BHI抗性固体培 养基(添加氯化血红素、维生素K、无菌脱纤维羊血和5斗吕／IIll红霉素)培养牙龈卟啉单胞菌W83 和W83一PG0839菌株。两菌株厌氧培养7天后传代。液体培养24h后，10，000×g，4。C离心15 x OD600，将菌悬液浓度调至1108爪／IIll。10，000×g，40c离心15rain后弃上清，用含10％小牛 modified 血清的低糖Dulbecco’s改良细胞培养基(Dulb