三对六溴环十二烷手性异构体对人体肝细胞(HepG2)毒性评价.pdfVIP

第四届全国环境化学学术大会论文集(上册) 三对六溴环十二烷手性异构体对人体肝细胞(Hep G2)的毒性评价 张晓岭4，杨方星8，徐超6，刘维屏6，徐盈4 8(淡水生态与生物技术国家重点实验室，中科院水生生物研究所，武汉，430072) b(环境与生物工程学院，浙江工业大学，杭州，310032) 摘要：本文利用反相高效液相色谱，在肛环糊精柱上对三对六溴环十二烷(]-IBCD)手性对映体进行了拆 分．然后，利用MTT、刃天青和LDH释放实验来检测HBCD立体异构体的细胞毒性．三种实验结果一致 体对中，右旋体的毒性显著地大于左旋体的毒性。同时，对照及暴露组中胞内活性氧水平被检测。LDH释 放与活性氧(ROs)水平问良好的相关性结果显示：HBCD异构体的细胞毒性机理可能介导于氧化损伤。 本研究结果表明：对于HBCD的环境及人类健康风险评价必须基于其手性异构体水平上的研究。 关键词： 六溴环十二烷；细胞毒性；活性氧；非对映异构体；对映异构体。 0．引言 六溴环十二烷(HBCD)是一种广泛添加于各种泡沫及织物中的溴代阻燃剂。在2006 年，全球用量达到了20000吨以上1。研究表明：HBCD是一种具有生物累积和生物放大作 用的脂溶性化合物，广泛存在于各种环境介质和生物体中2。 I-IBCD理论上具有十六种立体异构体，但市售HBCD主要包括三种手性异构体对(n．，p， ?-HBCD)。有研究表明：各种水生及陆生生物有机体对HBCD非对映体及手性对映体可以 选择性富集3。但目前关于HBCD毒理学的研究基本上都集中在其混合物上。关于HBCD 非对映异构体的毒性报道则很少，更谈不上对其手性异构体的毒理学研究了。原因可能在于 至今还没有市售HBCD手性对映体标样． 本研究中，利用高效液相色谱(HPLC)制备了纯的HBCD立体异构体标样。然后以H印 G2细胞为模型，利用MI’I、刃天青和LDH释放实验检测了HBCD各异构体的毒性。又因 有报道，称其为过氧化物酶体增殖剂，所以本实验检测了暴露细胞内活性氧(ROS)水平， 以考察其与细胞毒性问的关系。由于HBCD手性异构体生物学行为的报道至今未见报道， 因此本实验结果将为HBCD更加全面的生态风险评价提供有用的信息。 1．材料和方法 1．1材料 G2细胞等。 技术级HBCD混合物；Hep 1．2色谱分离 首先利用反相高效液相色谱，在C18柱上分离制各三种非对映体(Q．，璺-Y堋CD)， 流动相为甲醇／水(94／6)。然后在B一环糊精柱上分别从非对映体(a一，B一，Y-HBCD) 分离制备手性对映体(+)和(一)a一，B一，Y—HBCD，流动相分别为95％、100％和75％甲醇／ and25。C。 已腈混合液，柱温分别为5，5 1．3细胞培养及毒性实验 G2细胞以1×Io个细胞／孔的密度接种在96孔板上。贴壁培养24小时后，把培养基 Hep 299 第凹描幸嘲“境化学学术^盒诧上鼙l』册 5 1 0 5 0和10 按成雷有币个IIBCD异构件的暴巍被．暴露浓度为0 0¨B／m 八DMsof终浓腹≤05％)。每个暴露浓度擎少=个平行。绌胞破鐾矗24h厉．丹别进行盯T 刃天青．LDH释放赁骑和胞内舯S水平捌；：j三， 2结果 2 I细胞毒性实验及胞内ROS水平 从图1可以看出髓着各暴露婊度的升高，LDH释放运渐增多：并且肇露十}【BCD右旋体细 『抱，冀LDII释放显著帕多f晕露f走旌体的。圈2结果显示：胞内R峭乍成与暴露浓度也早 刺教关系：随着各暴露浓度的刀高，胞内R0s水平升高：暴盖：；；1IHICD右旋体的细胞+其艴 内ROS的水平显著的高于錾露』^旋作的细胞内ROS水平。 ’B～… 1 昌：。置．j Vo|，』l ¨n¨U。 Lm湖 ’D口¨，帅 · 磐_删m=}12