新遗传毒性生物标志物探索.pdfVIP

中国环境诱变荆学会第14届学术交流会议论文集 新的遗传毒性生物标志物的探索 武兀峰，粟洋。厩新明，任进 中国科学院上海药物研究所，上海市祖冲之路555号，201203 关键词：遗传毒性；基因；生物标志物 目的：准确评价化学物质的遗传毒性至关重要，分子生物标志物是毒性评价与检测的重要方法。前期研究 中，我们采用基因芯片技术对给予多种遗传毒性化合物的小鼠肝脏基因表达谱进行分析，其中，特异性诱 导最强的是一个功能未知的基因，提示其可能与遗传物质造成的损伤应答有关。本研究拟深入研究该基因 成为全新遗传毒性生物标志物的可能性，并初步探讨其功能。 方法：①根据NCBI上给出的该基因序列，设计特异性引物，选取基因芯片实验中所用部分化合物通过 Real-time PCR方法验证基因芯片数据。②Real．timePCR方法考察基因表达的组织分布特征。③设计该基 因特异的siRNA，转染NIH一3T3后，以Cs．1371，射线照射，通过彗星实验和微核实验考查该基因被knock down后，细胞对丫射线造成的DNA损伤和染色体损伤的改变与正常细胞相比是否有差异。④给予NIH．313 一系列阳性化合物考察该基因是否被诱导上调，且将该基因表达与微核相比较，分析二者的相关性和优越 性。 结果：OReal-timePCR结果重现了基因芯片数据，即该基因特异地被遗传毒性物质诱导。②该基因在小鼠 心、肝，脾、肺、肾和胚胎中都有表达，其中在脾脏和胚胎表达较高。③该基因被knockdown后，’r线诱 以诱导NIH．3T3细胞的该基因表达上调，MMS诱导该基因上调呈剂量依赖性，且剂量反应关系和时间方 面优于微核试验。提示该基因可以作为一个潜在的评价遗传毒性的标志物。 结论：该基因的表达可以特异性被遗传毒性物质诱导，有可能成为一个新的遗传毒性生物标志物。该基因 功能可能与DNA损伤应答或DNA修复相关。 一、研究背景 遗传毒性是指由外界化学、物理、生物因子等引起的对生物细胞遗传物质(如DNA、染色质等)的损 害作用，与致癌性有着密切的联系。对化学物质的遗传毒性进行正确地预测和评价一直是一个重要的研究 内容。目前已开发出多种评价遗传毒性的方法，但没有单独一种可以非常准确地预测化合物的遗传毒性。 近十几年来，分子生物学的发展和各种新技术的出现，为遗传毒性的检测与机制研究提供了新的思路 和手段；其中，利用生物标志物作为环境样品毒性检测与评价的研究方法受到国际上日益广泛的重视。人 们利用基因芯片技术，通过比较遗传毒性物质和非遗传毒性物质的基因表达谱的差异，致力于寻找可用于 评价遗传毒性的新的生物标志物。 目前，人类基因组计划已进入功能基因组学研究阶段，基因功能研究的高速发展为新的分子生物标志 物的探索与研究带来了机遇，探索具有更好特异性和敏感性的新的遗传毒性生物标志物，对于环境中的遗 传毒性物质的危险度评估、预测、深入探讨毒性机制具有重要的意义。 二、前期数据 1．基因芯片试验 前期我们利用基因芯片技术通过分析给予遗传毒性物质和非遗传毒性物质的小鼠肝脏基因表达谱的差 异，致力于寻找新的遗传毒性标志物。 我们选择了7个已知具有遗传毒性并且作用机制不同的化合物ENU(乙基亚硝基脲，150mg／kg)、DPN 249 十目#墟*圭M学奇苹14j学术￡*}**tl 析。 对§口芯H数据m{1分析月，我m筛4…约50十’遗忙雄性特抖性¨关的假＆标志物基目。根据这! 基目∞i镳忭、表达改变∞程度对遗传毒性物质m菩∞特异性等因素．对候选基目进行综☆评分，得* 景Ⅻ∞{目自一自№^目基目．我们暂时称之为BC。 雌 2 i目≈H数据∞验证 4hrF20hrDPN #啷I-timeper验Ⅱ。结罩Bi．十鼠给千DEN 4ll／20hr、ENU4hr、RAT4hr月．Ⅱ脏中 4hEtOH 诖基目的表达均有8著增高i给予TCE4h、TCE20h、FAO