慢病毒载体在慢性疼痛基因治疗中应用可行性.pdfVIP

国际疼痛研究协会(IASP)将疼痛定义为：“伴随着组织损伤或潜在的组织损伤并由 这种损伤引起的一种不愉快的感觉和情绪体验”。但是慢性疼痛的概念目前尚不统一，主 要是时间不明确，IASP在1986年提出“凡是疼痛持续或间歇性地持续3个月以上者均称为慢 性疼痛”。而以往在临床上一般认为疼痛持续6个月以上时称为慢性疼痛。根据病情，现在 规定一种急性疾病或一次损伤性疼痛持续超过正常所需的治愈时间，或间隔数个月或数年 后持续1个月时，仍称为慢性疼痛。其根据是急性疾病或损伤治愈时间为2。4周，长则6周， 如果治愈后1个月仍出现疼痛，则认定为慢性疼痛。 。目前慢性疼痛的治疗主要是应用麻醉性镇痛剂和非甾体类抗炎药等，但往往出现耐 药或药物成瘾，并涉及许多器官或系统的其他副作用。正是基于对慢性疼痛的分子生物 学机制有了更加深入的了解，人们才有可能在基因水平上探讨其治疗，为疼痛治疗开辟 一条新的途径——基因治疗。基因治疗的最初目的是传送特殊的基因至预定的靶细胞，并 且直接表达该基因的性质，达到治疗效果。作为一项新的生物干预手段，基因治疗已被广 泛应用于肿瘤和遗传性疾病等领域的治疗与应用基础研究中。基因治疗的出现同时也为慢 性顽固性疼痛(神经病理性疼痛和恶性肿瘤的疼痛等)的临床治疗揭开了新的篇章。但 是，随着慢性疼痛基因治疗研究的不断深入，一个亟待解决的问题出现了，即载体问题， 如何将目的基因导人靶细胞，且稳定而高效的表达，进而实现向靶细胞或靶组织中引入 外源基因片段，以弥补基因的缺陷或抑制基因的异常表达，达到治疗的目的。基因治疗的 载体分为病毒载体和非病毒载体。 病毒载体因其结构简单，易于加工，且感染效率高，靶细胞特异性好等优势，而备 受青睐。现已被用于慢性疼痛的基因治疗研究的病毒载体有：腺病毒载体、腺相关病毒载 体、逆转录病毒载体及单纯疱疹病毒载体等。但理想的基因载体则应具备：①靶向特异 性，可被免疫系统识别；②高度稳定，易制备；③安全性高，无毒无害；④有利于基因高 效转移和长期表达；⑤容量大，易人工合成，缺乏自动复制能力。从这个角度看，上述 vector。LvV)以其可感染分裂细胞及非分裂细胞、不易诱发宿主免疫反应、表达稳定性良 好、容量大等优点，已成为当前研究的热点。 一、慢病毒的相关基础研究 科，包括非灵长类慢病毒和灵长类慢病毒，前者包括马传染性贫血病毒(EIAV)、山羊 INANEsTHEsIoLoGY2()()9 麻醉学新进展ADVANcEs 疫缺陷病毒(sIv)。其中HIV-l载体最常用。 构，即核心蛋白、逆转录酶(用于复制)和外壳糖蛋白(决定感染靶向性)：两侧为长末端 助基因vif、vpu、vpr和nefo 图49-1HIv前病毒的基因组结构 pro编码的蛋白具有切割蛋白前体的酶效应；tat编码的Tat蛋白是有效的转录激活蛋白， 程。因此Tat及Rev蛋白分别在转录及转录后水平调节HIv基因的表达，两者的共同作用是 vpr形成复合物，因其具备核定位信号作用而有利于自身进入靶细胞核，且不完全依赖靶细 可借此进入病毒蛋白壳。 HIv．1是Lv中最具特征性的病毒，第一个Lvv系统即以此病毒为基础进行构建的。 编码反式作用蛋白的序列进行分离，载体系统包括包装成分和载体成分。早期的设计中， 载体表达系统由二质粒构成，即包装质粒和载体质粒，因前者保留了HIv．1基因组中顺式作 用元件之外所有的成分，使共转染时产生复制能力HIv_l病毒的危险性极高，故不适合用于 基因治疗。 经过大量的试验研究，现在三质粒表达系统成为主流。该系统也是逐渐完善的：①第 一代Lvv系统：由包装质粒、包膜质粒及载体质粒三种质粒组成。包装质粒去除了所有顺 式作用元件，在巨细胞病毒(cMv)启动子等的作用下可以表达除Env外的所有蛋白。 包含所有的包装、转导及转基因表达所必需的顺式作用元件。包膜质粒的发明扩大了感染 谱，并可获得更高滴度的慢病毒颗粒，且减少产生有复制能力病毒的可能。三质粒系统 的出现是慢病毒载体里程碑式的发展。②第二代LvV系统：即自身失活(sIN)的慢病毒 载体，因慢病毒启动子和增强子被替换，无法产生有复制能力病毒，使该载体系统更加 安全。③第三代LVv系统：在第二代Lvv的基础上。应用可诱导性基因系统，人为地控 制基因的表达，是这一代载体的突出特点。故第三代LVv又称为可调控慢病毒载体。其 中，四环素一可诱导系统是经典的代表。