猪霍乱沙门氏菌为载体在鸡体内传递外源基因可行性研究.pdfVIP

第十三次学术研讨会会议论文集 释，开展APP对肺脏作用受体的研究，特别是从分子水平来探讨其发病机理，已经成为揭示疾病发 生本质和研制新型疫苗的必经之路。 酵母双杂交系统是由Fields和Song等在研究真核基冈转录调控中建立的。该技术是发现和研究蛋 白质相互作用的新技术，近几年得到了广泛的运用，可用来研究活细胞内蛋臼质的相互作用，还能 用来发现新的蛋白质作用，是一种具有很高灵敏度的研究技术18】。酵母双杂交系统的最为重要的用 途就是从cDNA文库中寻找与已知蛋白质相互作用的未知蛋白质，枪测报导基因的转录情况，寻找 与己知蛋白质能相互作用的未知蛋白质。目前该技术在研究肿瘤、病毒、植物细胞以及寄牛虫方面 均取得了突破性的进展咿。1Ul，但是在细莳病原研究方面仍是空白，因此探索病原菌与机体宿主细胞|’日J 相互作用的分子机制，寻找其作用的受体蛋白对于此类疾病的防制和最终清除，具有非常雨要的意 义。本实验在酵母双杂交GAL4系统基础上成功地构建了放线杆菌omp与GAL4BD结构域的重组表达 自主激活作用。这样，就能利用放线杆菌omp蛋白为诱饵，从猪肺泡上皮细胞cDNA文库中去钓取与其 相互作用的蛋白。为研究猪传染性胸膜肺炎发病的分子机制奠定基础。 参考文献(略) 猪霍乱沙门氏菌为载体在鸡体内传递外源基因的可行性研究 王亚余兴龙’陈招娣李波 (湖南农业大学动物医学院，湖南长沙410128) 和体内接种的方法，研究该真核表达质粒在体外和体内的稳定性。将重组菌c5()0(pvAxl)分别以不同剂量口服接 种雏鸡，并在雏鸡体内传代接种的方法，研究该重组菌对雏鸡的安全性。结果显示重组菌在体外培养过程中，所携 带质粒的重组菌在有抗性选择压力条件下传代过程中存在一定的稳定性。在体内接种过程中，粪便分离菌，血液， 肝脏，脾脏，肠道粘膜均能检测到目的基因，表明重组菌侵入雏鸡体内的过程中是稳定的。上述结果提示彳4用该减 毒沙门菌作为载体传递外源基因接种雏鸡具有相对稳定性和安全性，为减毒猪霍乱沙门氏菌作为免疫基因佐剂活载体 提供了前提。 关键词减毒猪霍乱沙门氏菌；pwⅨl；安全性；稳定性 减毒胞内寄生菌作为一种良好的载体，是外源基因传递的新途径。70年代以来，减毒沙门菌的 口服活菌苗已广泛应用于预防人、兽、家禽的感染性疾病，取得了令人瞩目的成就‘¨。本实验通过 定性，为猪霍乱沙门氏菌作为外源基因活载体的研究提供了更广阔的应用前景。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1菌株与质粒 携带空质粒的减毒猪霍乱沙门氏重组菌C500(pVAxl)，由本实验室构建；猪霍乱沙门菌疫苗菌 购自湖南亚华种业股份有限公司生物药厂。批号：200710031。 作者简介：王亚(1981．)，男，湖南石门人，湖南农业大学动物医学院预防兽医硕士研究生，分子病毒学与免疫学方 向。 ’通讯作者，xlyu999@yalloo．com．cn 猪的传染病一猪细菌病 1．2方法 1．2．1 重组菌株的体外稳定性试验 37℃培养16一18h后计数，观察重组菌生长率。 有选择性压力(kana+)LB平板菌落数 重组菌生长率： ×loo％ 无选择性压力(kaIla-)LB平板菌落数 1．2．2重组酋对雏鸡的安全性试验 1．2．2．1不同剂量的莺组菌接种后对雏鸡的生长影响 只，设立PBs对照组，试验鸡均隔离饲养，接种后连续饲养2周，每天观察试验鸡生长情况，检查 是否有眼观病变。分别于口服接种前和口服接种后2周称重，检测不同剂量的重组菌对雏鸡体重的 影响。 1．2．2．2重组菌在雏鸡体内传代接种对雏鸡的生长情况影响 新鲜粪便中分离并培养重组菌，同样以109CRJ／只剂量口服接种于非免疫鸡，这样将霞组菌连续在 试验鸡体内传代培养至第5代，观察每代重组菌对试验鸡生长情况的影响，检查是否有眼观病变， 分别于每一代口服接种前和口服接种后第3天称重，设立PBs对照组，检测每代重组菌对试验鸡体 重的影响。 1．2．3重组菌株接种后在雏鸡体内的消长动态及稳定性试验 1．2．3．1分组与免疫 40只雏鸡分成2组： 第一组：20只为对照组，正常饲养。 第二组：20只为重组菌免疫组，第5日龄均灌服重组菌C500(嗍1)1×109CFU／只 1．2．3．2采样 口服接种重组菌后，分别于第