第十一章动物细胞大规模培养 教学内容.ppt

表11-1 动物细胞培养的产物 表11-4 微生物细胞和动物细胞性质的比较 表11-5 微生物和动物细胞培养方法的比较 表11-9 气升式反应器和传统培养方法的抗体产率比较 图11-3 中空纤维反应器示意图 表11-11流化床生物反应器与其它方法培养达到的细胞比较 图11-14 细胞灌注培养系统实例 图11-15 大规模动物细胞培养工艺流程图 水解乳蛋白 水解乳蛋白是常用的一种天然培养基，是由乳白蛋白经水解而制得，氨基酸的含量较高。一般配制成0.5%的溶液，或与合成培养基以1：1共同使用。 合成培养基是根据天然培养基的成分，用化学物质对细胞体内生存环境中各种已知物质在体外人工条件的模拟，经过反复实验筛选、强化和重新组合后形成的培养基。这种培养基在很多方面有天然培养基所无法比拟的优点，它既能经细胞提供一个近似于体内的生存环境，又便于控制和提供标准化体外生存环境。 目前所有的细胞培养都已采用经标准化生产、组成和含量都相对固定的各种合成培养基，并已有配制好的干粉型商品。尽管现在的合成培养基成分和含量已经较为复杂，但仍然不能完全满足体外培养细胞生长的需要，合成培养基中还是需要加入一定量的天然培养基予以补充。 合成培养基中一般都有哪些营养成分？ 问题 3、常用的合成培养基 目前合成培养基的种类已有数十种，大多数培养基都是为适应某种组织细胞的生长而在某种合成培养基的基础上改良而来的。目前较为常用的有199培养液、 Eagle (MEM、DMEM)培养液、RPMI1640培养液、HAM培养液等。表11-2为常用的培养基的成分和配方。 1、目前较常用的合成培养基有哪些？ 问题 2、为什么在要求较高的基础性研究中要用无血清培养液？ 3、无血清培养液由哪两部分组成？P208 差 好 环境适应 很差，缺乏保护性细胞壁 较好 机械强度 倍增时间一般为12-60h 倍增时间一般为0.5-2h 生长速率 苛刻 宽松，可利用多种底物 营养要求 内部和激素 内部 代谢调节方式 10-100μm 1-10μm 大小 动物细胞 微生物细胞 性质 二、动物细胞培养方法 所谓动物细胞培养是将动物组织或细胞从机体取出，分散成单个细胞，给予必要的生长条件，模拟体内生长环境，使其在体外继续生长和繁殖。表11-4，表11-5是微生物细胞与动物细胞性质和培养方法的比较。 很高 较低 对水纯度的要求 几天—3、4周 几小时—几天 培养时间 过滤 高温蒸煮 培养基灭菌方法 改变进入气体的氧浓度 改变搅拌速度、通气量、进气氧浓度 溶氧控制 较慢 速度快、范围广 搅拌速度 CO2-HCO3缓冲液 添加酸、碱 PH控制 动物细胞 微生物细胞 与微生物细胞培养类似，动物细胞的体外培养有两种类型：一类是非贴壁依赖性细胞，这类细胞可以采用与微生物培养类似的方法进行悬浮培养；另一类是贴壁依赖性细胞，它们需要附着于带适量电荷的固体或半固体表面上生长。 1、悬浮培养 P209 1、动物细胞培养有哪三种类型？ 提问 1、悬浮培养是用培养哪一类细胞的？ 问题 2、悬浮培养有何优缺点？ 2、贴壁培养 贴壁指必须贴附在固体介质表面上生长的细胞培养培养，主要用于非淋巴组织和许多单倍体等贴壁依赖性细胞的培养。由于大多数动物细胞属于贴壁依赖性细胞，贴壁培养是动物细胞培养的一种重要方法。 在贴壁培养过程中，贴壁依赖性细胞需要附着在带适量正电荷或半固体的表面上，原来是圆形的细胞一经贴壁就迅速铺展开来，然后开始有丝分裂，并很快进入对数生长期。一般可在数天后铺满生长表面，形成致密的细胞单层。 在贴壁培养依赖性细胞中，请比较滚瓶培养系统和微载体培养系统？ 问题 细胞贴壁一般分为贴壁因子吸附于培养表面、细胞与表面接触、细胞贴壁于培养表面和贴壁细胞在培养表面上扩展等几个步骤。图11-1为细胞在培养表面贴壁过程示意图。 3、固定化培养 固定化培养是既适用于贴壁依赖性细胞，又适用于非贴壁依赖性细胞的包埋培养方式，具有细胞生长密度高、抗剪切力和抗污染能力强等优点。 由于所培养的细胞的不同，固定化培养的方式也有不同，一般对于贴壁依赖性细胞通常采用胶原包埋，而对于非贴壁依赖性细胞则常用海藻酸钙包埋。 常用的细胞固定化的方法主要有吸附、共价贴附、离子/共价交联、包埋和微囊化等。 三、动物细胞培养生物反应器 自70年代以来，用于动物细胞培养的生长反应器有了很大的发展，种类越来越多，规模也越来越大。根据生物反应器的不同用途，有悬浮培养用、贴壁培养用、包埋培养用生物反应器等，