昆明小鼠胚胎输卯管移植技术的研究.pdfVIP

中困畜牧兽医学会兽医产科学分会第五届全体会议第‘l‘次学术研讨会论文集 昆明小鼠胚胎输卯管移植技术研究 陈恺Ip肖雄’，武建中2，白莹敏’，李跃民¨ (1．西南大学动物科技学院，重庆北碚400716：2．宜春学院生命科学与资源环境学院，江西宜备336000) 摘要：目的通过研究不同输卵管胚胎移植方法、不同细胞类型及适宜胚胎的数量对移植』亓妊娠 率和产仔率的影响，旨在提高小鼠胚胎移植效率。方法分别将卜细胞、2一细胞和8一细胞胚胎、移 入发情的假孕酬雌鼠的输卵管，选择最适宜的胚胎类型川予研究最合理的胚胎移植数量，以及比较 输卵管伞移植和膨火部移植两种方法的优劣。结果2一细胞胚胎移植后的妊娠率显著高于卜细胞和 8一细胞处理组(66．67％VS25％，33．33％，只O．05)；每只小鼠输卵管移植25个2一细胞胚胎后的产 仔率显著高于15个和35个两处理组(36％VS16．67％，10．71％，尸O．05)；采刚输卵管壁切口移植 75％。38．9％VS 的妊娠率和产仔率显著高于输卵管伞移植(50％VS 49．3％，P0．05)。结论采用 25枚左以的2一细胞期胚胎通过输卵管壁切口移植的方法可以取得较高的输卵管移植成功率。． 关键词：昆明小鼠；输卵管移植；2一细胞胚胎：输多p管肇切口移植 白五十年代以来人类建立了受精卵和早期胚胎的采集技术之后，很快就完成了早期胚向代母体 内输卵管及子宫移植的胚胎移植技术的开发和研究。小鼠的胚胎移植技术对于实验动物学研究及生 命科学研究具有重要价值，人类由小鼠进行发育生物学研究，包括胚胎的发生、发育、突变基冈的 研究、转基|灭|动物的研究等涉及胚胎体外操作的各种研究，均需要进行胚胎移植入代母体内米完成 lII。胚胎移植方法分为输卵管移植法和子宫移植’法【21。对于处于桑葚胚期之前的早期胚胎，通常使 用输卵管移植法。输卵管移植法又有两种，常规方法是是经输卵管伞部移植法，但是相对丁一些代 母品系输卵管口较小、较短的问题。经输卵管伞部移植难度火，不易操作，本试验采用一种新的经由 膨大部移植的方法，同时通过研究移入发情的假孕KM雌鼠的输卵管中的细胞类弛及适宜胚胎的数 量对移植后妊娠率和产仔率的影响，以提高小鼠胚胎移植效率。 1材料与方法 1．1材料 1．1．．1实验动物 昆明小鼠6～8周龄，体重22-259，购于重庆市中药研究所动物中心，在本实验室饲养繁殖， 光照12--14h，饲喂普通仔猪全价饲料，自由饮水、采食。 1．1．2主要试剂 孕马血清促性腺激素粉剂(PMSG，宁波激素制品厂)，人绒毛膜促性腺激素粉剂(hCG，宁波 激素制晶厂)，M2及M16培养液(sigma)，846合剂。 。 1．1．3实验仪器 科剪、眼科镊、手术缝合针、手术缝合线、持针钳、酒精灯等。 1．2方法 作者简介t睬恺(1985-)．男．在读研究生．研究方向：艋床丹医学．E-maihcbenkai0306@163，com ’通讯作者：李跃民，男．教授．博士生导师．E-maihlym@swu．com 93 中国畜牧兽医学会兽医产科学分会笫五届令体会}义第。．次学术研讨会论文集 1．2。1小鼠的超数排多日 当基与正常撬鬣|霹笼交配，次秘检查溪道栓，存淤遴栓者记8．5d供体鼠。 1．2．2输卵管胚胎的收集 ①受精单细胞胚胎的收集：见阴道栓的O．5d供卵鼠颈椎脱臼致死后，酒精浸泡消毒，剖开腹 腔，将卵巢连同输卵管一起取出置‘于盛有M2的平皿中，镜‘卜．找出输卵管的膨人部井川游丝镊子撅 教，收集郛团，删检雾赞移入透明质酸酶孛，待穿豳分敷成警令受精卵屠，隧郄将其转入新M2培 养液，删M2洗3～5次后，将卵移予M16培养液予37C、5％C02培养箱培养。②2．细胞籀l8．细胞 胚胎的收集：将她阴道栓的1．5d供卵鼠颈椎脱臼致死后，与上述同样方法获取包括输卵管的卵巢置 于盛有M2的平皿中，镜．卜．找山输卵管伞部，刚吸有M2操作液的冲胚针Ell输卵管伞部向盘管结合 郝冲洗坯滁，冲粕液体静置冀刻后，在体视最微镜‘卜．，耀捡卵针将发育良好镌2．