咖啡酸抗LPS导致奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤.pdfVIP

I第四届京津冀一体化畜牧兽医科技创新研讨会 论文集 I暨“瑞普杯”新思想、新方法、新观点论坛 兽医学部分·基础性研究 咖啡酸抗LPS导致的 奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤 蒋小玉1。宋世秀1，刘明江1，万长荣’，尹朋1，李德银2，宫平2。刘凤华”．许剑琴“ (1．中国农业大学动物医学院中兽医实验室。北京海淀100193； 2．北京农学院动物科技学院奶牛营养学北京市重点实验室，北京昌平102206) 摘要：为了研究蒲公英对奶牛乳房炎的治疗效果，我们在实验室前期研究的基础上采用酶消化法获 得并培养原代奶牛乳腺上皮细胞，以LPS(50ug／m1)处理原代奶牛乳腺上皮细胞12h作为实验模型， 以12，25，50uq／mI咖啡酸预处理细胞3h作为梯度浓度剂量治疗条件，研究蒲公英主要成分咖啡酸 对LPS刺激下乳腺上皮细胞氧化损伤的保护作用及其分子机制。结果表明：经LPS处理的原代奶 j。与模型组相比，治疗组降低了N0、 (PcO．01)；超氧化物歧化酶(SOD)活性降低(P0．01 0．01 l。综上实验结果表踢蒲公英主要成分咖啡酸能抗LPS导致的奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤。 关键词：LPS；氧化损伤；咖啡酸i抗氧化 蒲公英是治疗奶牛乳房炎的要药，现代研究表明蒲公英 含有大量多酚，具有抗炎、抗氧化、抗癌等生物活性…，实验 055：B5)；超氧化物歧化酶(T_一s0D)试剂，盒南京建成生物 室前期研究表明蒲公英主要成分咖啡酸具有很强的抗炎效 丁程研究所提供；丙二醛(MDA)测定试剂盒，南京建成生物 果，但革兰氏阴性菌导敛的炎症常伴随LPs诱导的细胞氧化 工程研究所提供；N0检测试剂盒，碧云灭生物技术研究所提 损伤，即LPs导致细胞损伤的机制不应仅被视为是炎性损 供；Trizol 伤，也应被视为包括ROs信号、氧化——抗氧化失调、细胞凋 磷酸二乙酯(Diethy SYBR Green QPcR试剂盒；氯仿、异丙醇、无水乙醇。 亡等一系列氧化应激转录事件的集合口】。目前尚未有咖啡 1．2实验仪器 酸对LPs导致的奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤的相关研究。 酶标仪；实时荧光定量PcR仪；生化培养箱；水浴锅等。 本文基于前期研究丁作，以LPs(50u∥“)处理原代奶牛乳腺 2试验方法 上皮细胞12h作为实验模型，以12，25，50ug／ml咖啡酸预处 2．1 细胞原代培养、实验分组及处理。 理细胞3I·作为治疗条件，研究蒲公英主要成分咖啡酸对LPs 刺激下乳腺上皮细胞氧化损伤的保护作用。 无菌操作获取健康荷斯坦奶牛的乳腺组织带回实验室， 将乳腺腺泡组织剪碎至约为lmm3，用含有双抗(200u／n1L青 1 实验材料与仪器 1．1 实验材料 离心管中，按3—4倍体积加入O．25％胰蛋自酶(含O．4％ED— 处于泌乳高峰期的健康荷斯坦奶牛；DMEM／F12培养 TA)，置于370c水浴恒温振荡器中温和振荡20min。取出用 基；标准胎牛血清；胰蛋白酶；L一谷氨酰胺(LcluEamlne)；II Il 型胶原酶(Typecoll89ene“yme)；氢化可的松(Hydmconi— 后除上清，用PBS洗涤2遍，再加入组织3—4倍体积的