亚低温治疗对心肺复苏后大鼠脑保护作用的研究.docVIP

亚低温治疗对心肺复苏后大鼠脑保护作用的研究 　　摘要：目的 研究亚低温治疗对窒息大鼠心肺复苏（CPR）后脑组织的保护作用。方法 建立心肺复苏大鼠模型，将60只SD大鼠随机分为假手术组（A组）、常温组（B组）、保存性低温组（C组）、复苏性低温组（D组），除A组外，其余各组均为心肺复苏组。心肺复苏组组内按心跳骤停的时间再分为3个亚组：4min组、5.5min组、7min组（n=6）。C组和D组分别在心B切开及血管穿刺操作，不进行心肺复苏，其余措施相同。各组于相应时间点取血和脑组织标本，分别观察各组脑组织病理学改变及脑组织含水量。结果 与A组相比，B、C、D组脑组织含水量及病理学评分均有明显的增加（P0.05），病理学评分有明显的降低（P0.05）。结论 亚低温治疗能减轻窒息大鼠心肺复苏后脑损伤，具有脑保护效应。 　　关键词：亚低温；窒息心跳骤停；心肺复苏；脑保护 　　心跳骤停（cardiac arrest，CA）后为全脑缺血状态，脑损伤机制复杂不仅要渡过急性期的各种并发症，还要面对未来长期病残所带来的巨大物质和经济负担，因而对脑缺血进行积极有效的脑保护和脑复苏有着非常重要的理论和实践意义。近年脑复苏已经成为研究热点，低温是目前国内外公认的最有效的神经保护方法[1，2]，较多研究亦表明亚低温对复苏后脑组织有保护作用[3]，但其应用具体时机仍不明确。本文采用心脏停搏加心肺复苏术来模拟心肺复苏后大鼠的脑损伤，以复苏及复苏后30min行亚低温治疗，研究其对心肺复苏后大鼠脑组织的保护作用，为其临床应用提供理论依据。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料 　　1.1.1动物分组 选用健康成年SD大鼠（第三军医大学大坪医院野战外科研究所医学实验动物中心提供，动物生产许可证号SCXK（渝）2011～0006）60只，雌雄不限，体重310g～350g。动物随机分为4组，A组：假手术组（仅进行麻醉和气管切开插管、血管穿刺，不进行窒息及心肺复苏）；B组：常温组（动物行常规心肺复苏，不进行低温治疗，以1ml/kg?min速度泵注常温生理盐水对照）；C组：保存性低温组（心跳骤停时立即给予4℃生理盐水1ml/kg?min泵注降温，达到目标体温后，以0.25ml/kg?min维持体温，其余措施同常温组）；D组：复苏性低温组（ROSC后30min后给予4℃生理盐水1ml/kg?min泵注降温，达到目标体温后，以0.25ml/kg?min维持体温，其余措施同常温组）。B、C、D组均为心肺复苏组，其中各组内按心跳骤停时间（4min，5.5min，7min）的不同再分为三个亚组，各亚组均为6只。实验动物术前晚上禁食，允许自由饮水，定时测量体温，维持体温在正常范围，所有的手术过程均在无菌条件下进行，以避免对实验结果产生影响。 　　1.1.2动物模型的制备及给药方法 参照Hendrickx等创建的经典窒息法心肺复苏模型，按照心肺复苏Utstein-Style指南要求制作该模型，简述如下：大鼠称重，10%水合氯醛（首剂为0.35g/100g）腹腔注射麻醉，继以0.1g/kgoh补充麻醉。将动物仰卧固定于手术台上，心电监护连续监测标准肢体导联心电图。热敏温度仪探头润滑后插入肛门约3～4cm.进行持续深部肛温监测以替代脑温测定。小儿头皮针开放尾静脉通道，供复苏给药和补液用。常规备皮、消毒，行颈部正中切口，分离切开气管并插管。切开左侧腹股沟中部皮肤，分离股动脉，置入24G套管针，连接生物信号采集系统，显示动脉波形，监测平均动脉压（MAP），用稀释的肝素钠（上海第一生化药业有限公司）盐水间断性冲管，并将套管针缝合固定在皮肤上。大鼠术后室温下稳定10 min，静脉注射短效肌松剂琥珀胆碱（旭东海普制药有限公司）2mg/kg，同时夹闭气管致CA。如达到CA标准，按分组要求进行4℃盐水降温或常温盐水对照处理，CA持续4min，5.5min或7min后，立即实施心肺复苏。胸外按压频率160次/min，按压深度为大鼠胸廓前后径的1/3，接ALC-V9动物呼吸机（上海奥尔特生物科技有限公司）纯氧机械通气，呼吸频率80次/min，潮气量6ml/kg，按压10～15s后予肾上腺素（福州海王福药制药有限公司）0.02mg/kg，5%碳酸氢钠（四川科伦药业股份有限公司）1 mg/kg，2min内效果不明显者可重复给药，直到自主循环恢复（ROSC）。15min无效者放弃复苏。ROSC后连续监测平均动脉血压，心率（HR），心电。ROSC 4h后撤离呼吸机，处死动物。 　　1.2标本的采集 各组大鼠于心跳骤停时、ROSC后4h经股动脉取血3ml，标本即时离心（3000rmp，lOmin），取上清液于Eppendorf管，放入-70℃冰箱保存待测。留取血标本后，将大鼠置于冰垫上，加深麻醉，开胸暴