尼罗红-荧光光谱法测定布朗葡萄藻油脂含量的方法研究.pdfVIP

2015年第40卷第2期 中 国 油 脂 85 尼罗红 一荧光光谱法测定布朗葡萄藻 油脂含量的方法研究 邴 欣 ，宋 琪 ，刘 双 ，于道永 (中国石油大学(华东)生物工程与技术中心，山东青岛266580) 摘要：布朗葡萄藻因胞外分泌物多、细胞壁厚、聚集生长等原因，不能用传统的尼罗红染色方法进行 油脂含量测定。通过探索染色前处理和染色条件，优化了布朗葡萄藻的染色方法：藻液摇匀后超声 波处理3min(超声波参数为温度20℃、发射功率100W、频率40kHz)，3000×g离心去除培养基， 用体积分数8％的DMSO重悬细胞，调整悬液OD750到0．16，每 1mL样品加入 10 120Ixg／mL的 尼罗红丙酮溶液(尼罗红质量浓度 1．2 g／mL)，40oC水浴锅 中染色10min，荧光激发光波长 520 nm。改进的方法促进 了尼罗红与布朗葡萄藻的结合，提高了测定的稳定性和准确度。 关键词：布朗葡萄藻；油脂；尼罗红；荧光光谱法 中图分类号：TS222；TQ646 文献标志码 ：A 文章编号：1003—7969(2015)02—0085—05 Determination oflipidcontentinBotryococcusbrauniiby Nilered—-fluorescencespectrometry BINGXin，SONGQi，LIUShuang，YUDaoyong (CenterforBioengineeringandBiotechnology，ChinaUniversityofPetroleum (EastChina)， Qingdao266580，Shandong，China) Abstract：ThetraditionalNileredfluorescencedyeingmethodcouldnotbeappliedtodeterminethelipid contentinBotryococcusbrauniibecauseofitsextracellularexcretion，thickcellwallanddensecellcolo— nies．By studyingthepretreatmentandstainingconditions，thedetectionmethodwasoptimizedasfol— lows：rteatingalgalcellsbyultrasoundfor3minat20oI=，100W and40kHz，centrifugationat3000× gtoremovetheculturemedium，suspendingthecellswith8％ dimethylsulfoxidetoOD7501．6，every1 mLsampleaddedby10 LNileredacetonesolutionof120ixg,／mL(massconcentrationofNilered1．2 ~g／mL)，stainingat40oCofr10min．Thenthesamplewasmeasuredbyfluorescencespectrometerex- citedat520nm．TheinteractionbetweenNileredandmicroalgalcells，andthedetermination stability andaccuracywereenhancedafteroptimization． Keywords：Botryococcusbraunii；lipid；Nilered；fluorescencespectrometrymethod 煤、石油等化石燃料的急剧消耗，不仅导致化石 速发展…。微藻具有光合效率高、生长周期短、含 能源 日益枯竭，而且造成大量CO：进入大气 ，产生温 油量高等优点，是生物柴油生产的理