2012届高考生物《名师新讲堂》一轮复习课件：选修一1.3DNA和蛋白质技术.pptVIP

3.实验操作流程 粗分离——透析(去除小分子杂质) 　 纯化——凝胶色谱法进行分离和纯化 　 纯度鉴定——SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子量 重要考点提示 1. 红细胞洗涤过程中，洗涤三次后，上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则无法除去血浆蛋白；离心时转速要低，时间要短，否则白细胞等会一同沉淀，达不到分离效果。 2. 血红蛋白释放过程中，蒸馏水的作用是涨破红细胞，甲苯的作用主要是溶解细胞膜。 3. 为了加快干凝胶的膨胀，可将加入洗脱液的湿凝胶用沸水浴加热，逐渐升温至接近沸腾，通常只需1～2 h。这种方法不但节约时间，而且可以除去凝胶中可能带有的微生物，排除胶粒内的空气。 4.滴加样品时，吸管管口要贴着管壁环绕移动，防止破坏凝胶面。 例6　为了提取血红蛋白，从学校附近的屠宰场索取新鲜的猪血，对猪血处理的正确操作是(　　) A．要在采血容器中预先加入抗凝血剂柠檬酸钠 B．取血回来后，马上进行高速长时间离心 C．将离心后的血细胞加入清水缓慢搅拌 D．重复洗涤直到上清液呈红色为止 [答案]　A 例7　血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O2和部分CO2的运输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题。 (1)将实验流程补充完整：A为________，B为________。凝胶色谱法的基本原理是根据________而达到蛋白质分离的有效方法。 (2)洗涤红细胞的目的是去除________，洗涤次数过少，无法除去________；离心速度过高和时间过长会使________一同沉淀，达不到分离的效果。洗涤干净的标志是______________。释放血红蛋白的过程中起作用的是______________。 (3)在洗脱过程中加入物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)的目的是________________________。如果红色区带________________，说明色谱柱制作成功。 [答案]　(1)血红蛋白的释放　样品的加入和洗脱　相对分子质量的大小　(2)杂蛋白(血浆蛋白)　血浆蛋白　白细胞和淋巴细胞　离心后的上清液中没有黄色　蒸馏水和甲苯　(3)准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH和体内的一致　均匀一致的移动 【典例1】　下列叙述中错误的是(　　) A．改变NaCl溶液的浓度只能使DNA溶解而不能使其析出 B．在沸水浴中，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色 C．用电泳法可分离带电性质、分子大小和形状不同的蛋白质 D．用透析法可去除蛋白质样品中的小分子物质 【答案】　A 对应学生用书200页 【典例2】　(2010·广州调研)对血红蛋白(Hb)的研究结果表明，血红蛋白实际上是由珠蛋白、原卟琳和二价铁离子(Fe2＋)所组成的结合蛋白质，由4条肽链各结合一个辅基即血红素，O2结合于Fe2＋上，血红蛋白与氧疏松结合形成氧合血红蛋白(HbO2)，这种氧合作用在氧分压高时容易进行，在氧分压低时易于解离。红细胞结合和携带O2的过程并不影响Fe2＋，也就是说不会使之氧化为Fe3＋。Fe3＋无携带O2的能力。CO与Hb的亲和力大于O2，结合成HbCO后不能分离，致使Hb丧失运输O2和CO2的机能，这称为一氧化碳中毒即煤气中毒。 (1)用凝胶色谱法分离血红蛋白时，待______________接近色谱柱底端时，才用试管收集。血红蛋白因含____________________而呈现红色。 (2)要使血红蛋白从红细胞中释放出来，可选用的方法是________________________________________________________________________。 (3)红细胞具有运输氧的功能，是因为________________________________________________________________________。 (4)亚硝酸盐为强氧化剂，进入人体后，可使血红蛋白失去运输氧的功能，导致人体组织缺氧，其可能的原因是________________________________________________________________________。 【答案】　(1)红色区带　血红素　(2)将红细胞置于蒸馏水中，加40%体积的甲苯，搅拌使之破裂并释放血红蛋白　(3)红细胞中的血红蛋白与氧在氧分压高时容易结合，在氧分压低时又容易分离　(4)亚硝酸盐可使血细胞中低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白 一、DNA的粗提取与鉴定 1．DNA提取的方法 (1)基本思路：选用一定的________或________方法分离具有不同________或________的生物大分子。 (2)原理：利用DNA与________、________和______