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RAPD技术在动物遗传育种上的应用 翁小芳，黄国京，韦罕升 广西百色农业学校，百色533000 摘要：RAPD技术自1990年创．3-g‘来得到了广泛的应用，但其重复性差，多态性低和成本较高 等缺点始终是应用中较大的制约因素。近年来，RAPD技术在模板DNA获得方面有一定进展，并通过改 变反应条件和检测手段提高了结果的多态性和可重复性。本文综述了RAPD技术的原理，在动物育种 上的研究进展，并探讨了RAPD技术存在的问题，完善方法及应用景。 关键词：RAPD；品种；遗传育种 前言 GK．Williams和加利 RAPD(randomamplifiedpolymorphicDNA)技术是美国杜邦公司的科学家J 福尼亚生物研究所JWelsh两个研究小组几乎同时发展起来的检测DNA多态性的技术【1’21。它是利用 一系列碱基顺序随机排列的寡聚核苷酸作为引物。对目的基因组DNA进行扩增。这种特定的随机引 物与作为模板的基因组DNA上特定的位点结合，当这些结合位点在模板DNA上的分布符合RAPD扩 增反应条件。即在一定范围内模板DNA上有与引物互补的反向重复序列时，就可以扩增出该范围内 的DNA片段。不同物种基因组DNA中这种反向重复序列的数目和间隔距离的长短不同。通过扩增产 物的比较，可以识别出这些物种中基因组DNA的多态性片段。 RAPD技术由于其在检测DNA多态性上具有独特的方式和快捷、简便等特点，故其在短短的时 间内便渗透于动植物基因组研究的各个领域。并在动物的遗传育种中得到极为广泛的应用。 I RAPD技术的原理 RAPD是建立在PCR(聚合酶链反应)基础之上的遗传标记技术，其基本原理和PCR反应一样，通 常PCR反应所用的引物长度约20个核苷酸，而D不仅引物的序列短，而且核苷酸的组成和排列是随机 的。在PCR反应中与基因组的配对位置取决于随机吻合的程度，它的基本过程也是由高温变性、低 温退火、适温延伸等几个反应步骤组成一个周期，循环进行，使DNA迅速扩增。这一过程首先使被 扩增的DNA于高温下解链，作为模板，然后降温，让人工合成的随机寡核苷酸引物在低温条件下与 基因组单链DNA上的特定位点随机互相结合。DNA聚合酶在72C将单核苷酸从引物的3’端开始掺入 沿模板EhS-3’方向延伸，合成DNA新链，每一周期所产生的DNA均能作为下一轮反应的模板。所以， 反应产物的增加呈指数形式，经过30次循环，产物扩增倍数理论值达109，实际值达107。由此可见， RAPD技术是PCR技术的延伸13】。 2 RAPD技术在动物遗传育种中的应用 目前，RAPD技术己广泛应用于动物遗传作图、基因快速定位、特殊染色体片段的鉴定和分离、 性别鉴定以及群体遗传变异的检测14J。 76 2．1研究群体的遗传分化 检测。得到了鉴定这两个类群的遗传标记，并认为此标记对探索家牛的几个主要亚种的进化关系有 用。史宪伟等(1996)利用RAPD技术研究了云南矮马与普通马的遗传多样性。结果表明，云南马的群 体存在丰富的遗传多样性，矮型马与普通马之间存在明显的遗传分化[41。黄永富(1996)研究表明， RFLP 中国地方猪种mtDNA的遗传分化程度很低。而核DNA已有明显的品种分化。同时指出，mtDNA 技术和RAPD技术是研究群体遗传多样性、遗传结构和起源分化有效的方法【5】。李祥龙(1997)研究认 为，山羊核基因组存在较为丰富的遗传多样性和明显的遗传分化，结合mtDNARFLP分析结果支持 家山羊混合起源的学说【6|。陈永久等(1998)用RAPD研究中国貉亚种分化关系，结合形态分类，地理 分布、mtDNA多态分析以及进化遗传学的观点，认为陕西貉、广西貉和安徽貉可能与云南貉一越南 貉具有等同的分类地位。丁波等(1999)用RAPD分析白头叶猴的分类地位，结合形态学和地理分布特 点，结果验证白头叶猴可能是黑叶猴的一个亚种的观点【。71。 2．2研究品种(系)亲缘关系 动物在长期的自然选择和人工选择过程中，形成了不同的种群，基因额率也发生了分化。RAPD 是测定基因频率变化的有效手段。通过计算遗传相似程度研