哥伦比亚CNA血平板厌氧培养检测β-溶血性链球菌及应用分析.pdfVIP

2011食品安全技术与标准国际研讨会暨AOAC中国区会议论文集 哥伦比亚CNA血平板厌氧培养检测t3一溶血性链球菌的应用与分析 吴福平 王毅谦邵景东 (张家港出入境检验检疫局，张家港215600) 摘要：(目的)选择更为适合弘溶血性链球菌的分离培养基及培养条件。(方法)本文应用2种不同的分离培养基 及分离环境对实验菌株和实际样品进行分离比对，以寻求出实用高效的分离培养基及分离条件用于本菌检测。(结果) 从80件食品样品中检出ll株p．溶血性链球菌。(结论)哥伦比亚CNA血琼脂分离及厌氧培养可有效地提高食品中 p．溶血性链球菌检出。 关键词：争溶血性链球菌；哥伦比亚CNA血琼脂；厌氧培养 链球菌属中与食品卫生和安全有关的链球菌主要是13．溶血性链球菌，尤以A群链球菌(如化脓链球菌) 和B群链球菌(如无乳链球菌)为主¨。2J。13一溶血性链球菌对人的毒力较强，能够引起各种化脓性疾病、 肺炎、伤口感染和败血症等。t3．溶血性链球菌大多为兼性厌氧菌，少数为厌氧菌。最适生长温度为37℃， 溶血性链球菌的检验中主要使用血平板常规培养进行分离，杂菌对目标菌的干扰较大，本研究拟利用哥伦比 亚CNA血琼脂平板及36±l℃厌氧培养进行菌落分离，提高检出率。 l材料与方法 1．1材料 1329。 贺氏菌ATCCl2022、阪崎肠杆菌ATCC5 1．1．2培养基及主要试剂：葡萄糖肉浸液肉汤、血琼脂、哥伦比亚CNA琼脂、草酸钾人血浆、0．25％氯化钙、 API20STREP试剂盒。 1．1．3实验设备：培养箱、厌氧罐、拍打器。 1．1．4供试样品：鸡肉20批、生猪肉30批、生牛奶30批。 1．2方法 1．2．1实验菌株在血平板和哥伦比亚CNA血平板的分离情况 观察菌落生长情况； 1．2．2哥伦比亚CNA血平板需厌氧培养效果比较 将培养过夜的化脓链球菌、无乳链球菌菌液l：lO倍比稀释，吸取0．1ml于哥伦比亚CNA血平板涂布， 置于36±1℃厌氧、需氧培养24h，进行计数。 1．2．3样品的检测 培养进行检测。 2结果 2．I实验菌株在血平板和哥伦比亚CNA血平板的分离情况 —-345—· 2011食品安全技术与标准国际研讨会暨AOAC中国区会议论文集 2．2哥伦比亚CNA血平板在需厌氧环境下平板菌落数 鸡肉(20批) 3(化脓链球菌) 3(化脓链球菌) 生猪肉(30批) 2(化脓链球菌)、l(无乳链球菌) 3(化脓链球菌)，1(无乳链球菌) 生牛奶(30批) 2(无乳链球菌) 4(无乳链球菌) 3讨论 3．1多粘菌素是从多粘杆菌培养液中分离的一种多肽类抗生素。抗菌谱较窄，仅对格兰阴性需氧菌具有 较强的抗菌活性，其抗菌谱包括大部分临床致病的肠杆菌科细菌，如大肠埃希氏菌、肠杆菌属、柠檬酸杆菌 属、沙门是菌属、志贺氏菌属、克雷伯菌、流感杆菌等。铜绿假单胞菌属和鲍曼不动菌属，包括大部分耐药 的菌株对其高度敏感【4】。多粘菌素是一种杀菌药，对生长繁殖期和静止期细菌均有杀菌作用【5】。 3．2萘啶酮酸，抗细菌性合成化合物之一，具有宽广的抗菌谱，特别对革兰氏阴性菌有很强的效力。对大 肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及变形杆菌等，具抑菌和杀菌作用。 3．3从实验菌株在哥伦比亚CNA血平板生长情况显示，化脓链球菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌等 ——346—- 201l食品安全技术与标准国际研讨会暨AOAC中国区会议论文集 G+菌则在平板上生长良好，沙门氏菌、志贺氏菌、大肠杆菌等G．杆菌在平板上均未生长。哥伦比亚CNA琼 脂在成分配比上增加了lO％多粘菌素及10％萘啶酮酸‘¨’，所含10％多粘菌素及萘啶酮酸有效抑制了G．杆菌 的生长，降低了对目标菌生长的干扰。 3．4通过对4株化脓链球菌、无乳链球菌需厌氧培养计数，发现厌氧培养所得的菌落数明显高于常氧培 养，而且在培养中发现，厌氧培养使得目标菌的形态更为典型，具体表现为菌落变大，溶血性增强，同时对 非目标菌