黄颡鱼免疫球蛋白3型轻链基因cDNA及其表达分析.pdfVIP

第 33卷第 L2期 水 产 科 学 VoL33NO．12 2O14年 l2月 FIBHERlES SC1ENCE DeC2O11 黄颡鱼免疫球蛋 白3型轻链基因cDNA及其表达分析 李春涛 ，蒋 自立 ，魏福伦 ，杨秀荣 (1．遵义师范学院 生命科学学院，赤水河流域动物资源保护与应用研究重点实验窒，贵州 遵义 563000； 2．淡水生物生殖与发育教育部重点实验室，西南大学 生命科学学院，重庆 400715) 摘 要 ：应用同源克隆和 RACE—PCR方法获得黄颡鱼免疫球蛋 白3型轻链(IgL3)基 因全长 cDNA，并 分析了该基因在组织 中的表达 。黄颡鱼 IgL3的 cDNA全长为 965bp，包含 553bp非编码区，3189 bp非编码 区，开放 阅读框 723bp，编码 241个氨基酸 。黄颡鱼与其他 6种硬骨鱼类 IgL3氨基酸序列 比对分析表明，黄颡鱼 IgL3氨基酸序列与大鳍鲮 IgL3型的相似性最高，为 72．8 ，与大西洋鲑 IgL3 型的相似性最低 ，为 42．2％。进化树分析表 明，黄颡鱼 IgL与大鳍缝 IgL3型聚为一支 同时与其他鱼 类 IgL3型聚为一簇 ，明显与 L1和L2进化支不同。实时PCR显示 ，黄颡鱼 IgL3基因主要在头 肾、脾 脏 、血细胞、鳃和肠 中转录表达 ；注射嗜水气单胞菌后 ，头肾、脾脏和血细胞 IgL3基 因表达量有显著上 升 。表明这些组织是黄颡鱼 IgL3型基因主要 的表达器官，在免疫反应具有重要作用 。 关键词 ：黄颡鱼；IgL3；cDNA；实时 PCR；表达 中图分类号 ：S917．1 文献标识码 ：A 文章编号 ：1003—1ll1(2014)12—0764—06 免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)是 由完全相 IgL起源及分类 ，更多脊椎动物 IgL基因序列测定及其 同的两条重链和完全相 同的两条轻链通过链 间二 表达研究很有必要。到 目前 ，多种鱼类 IgL3型基因被 硫键连接成的糖蛋 白分子。它是 B淋 巴细胞受抗 鉴定，如，斑点叉尾鲴[1O]、斑马鱼(Daniorerio)[11-13]、大 原刺激后增值分化产生 的，能与相应抗原特异性结 西 洋 鲑 (Salmo salar)[63、虹 鳟 (Oncorhynchus 合 ，发挥体液免疫功能[1]。根据轻链恒定 区的差 mykiss)[14]、鲤鱼 (C prn“scarpio) 等。 异 ，哺乳类轻链被划分为 和 两种轻链类型c3]，两 黄颡鱼 (Pelteobagrusfulvidraco)属鲇形 目， 栖类 3种类型 ，即 、和 a[4]，鸟类仅仅 一种轻链 鳞科 ，为我国重要 的养殖经济鱼类。本研究克隆了 类型r5]。硬骨鱼类 IgL的早期研究，是将鱼类免疫 黄颡鱼 IgL3基因cDNA全长 ，应用实时 PCR分析 球蛋白轻链归纳到到哺乳类 的 和 型 中，但后来 了该基因在不同组织 中的表达，以及细菌免疫后 的 发现无论硬骨鱼类的任何一种 IgL都不能明确划 表达变化 ，以期为研究黄颡鱼 1g的结构和功能以及 归为 ．c或 型 ，而之外形成单独 的分支[6]。Ghaf— 免疫抗感染机制奠定分子基础 ，也为更深入研究硬 fariL7将在斑点叉尾鲴(Ictaluruspunctatus)发现的 骨鱼类 IgL提供更多的数据和资料。 两种 IgL命名为 F和 G型。随着硬骨鱼类 IgL不 1 材料与方法 断发现 ，Coscia等 将硬骨鱼类 IgL划分为 3个类 型，即U 、L2和 L3。但 Edholm等 的研究认为， 1．1 试验材料 硬骨鱼类的IgL1、IgL2和 IgL3可以归纳进 (L2) 1．1