高效液相色谱法测定甘草内生真菌产芦丁条件优化的研究.pdfVIP

第 35卷 第 1O期 家畜生态学报 Vo1．35NO．10 2014年 1O月 ActaEcologiaeAnimalisDomastici Oct．2014 高效液相色谱法测定甘草 内生真菌 产芦丁条件优化的研究 马正南 。，李勤凡 ¨，耿果霞 (1．西北农林科技大学 动物医学院，陕西杨凌 712100；2．西藏林芝地区职业技术学校，西藏 林芝 860000) [摘 要] 通过优化利用高效液相色谱法(HPLC)测定甘草 内生真菌产芦丁的方法条件，对 从甘草 中分离得到的产芦丁 内生真菌进行研究，为后期利用 HPLC法筛选产活性物质 内生真 菌的研究奠定基础。对产芦丁甘草 内生真菌采用高效液相色谱法 (HPLC)进行筛选 ，并通过 条件优化找到检测产芦丁内生真菌的最优 HPLC方法，找到 HPLC最优条件组合筛选产芦丁 的甘草 内生真菌。HPLC最优条件组合为：流动相A为 乙腈、流动相B为0．05 磷酸水溶液、 柱温T一5O℃、流动相比例有机相A(乙腈)：流动相 B(0．05 磷酸)一0．2O：0．8O、波长 一 360nm、进样体积 V一20 “L。 [关键词] 高效液相色谱法；甘草 内生真菌；芦丁 [中图分类号] $811．6 [文献标识码] A [文章编号] 1005—5228(2014)10—0058—06 甘草是一种重要 的中药 ，可以分离出内生真菌 ， 尚未见关于 HPLC检测植物 内生真菌产芦丁的条 内生真菌能产有关活性物质如甘草酸、甘草次酸、黄 件优化的文献报道 。本试验以甘草 内生菌的研究为 酮、生物碱等多种成分 ，其 中甘草酸和黄酮是最重要 依托 ，通过对不同流动相、柱温、流动相流速 、波长、 的活性成分。甘草酸具有抗病毒 、抗炎及免疫调节 进样体积等条件的优化筛选探索内生菌代谢产物 中 等作用。黄酮具有抗炎、抗病毒、利胆、强心、镇静和 黄酮 (主要是芦丁)成分 HPLC测定最优化组合条 镇痛等作用。甘草黄酮的获得主要是从野生或者种 件 ，为后期通过微生物途径开发芦丁来源提供更多 植甘草中提取 的。由于干旱 、过度采挖等原因，造成 新的候选资源以适应生产需要 ，还可以为后续从其 甘草资源短缺 ，来源不足。所 以，积极寻求一种新的 他植物 (如槐米、黑麦等)利用 HPLC法筛选产芦丁 黄酮来源是具有重大意义的研究工作。内生菌是指 内生真菌的研究提供试验依据。 在其生活史的部分或全部阶段都生活在植物组织 内 1 材料与方法 的细菌 、真菌或放线菌 ，且不会 引起植物病害。植物 内生菌能独立产生丰富 的次生代谢产物 ，是天然产 1．1 试验材料 物的重要来源和具有高度开发价值 的新型生物资 甘草内生真菌处理样品溶液制备 ：参照文献 的 源_l】]，其次生代谢产物的检测的常见方法有酶法、气 分离方法_5从宁夏野生甘草中分离出内生真菌 ，对 相色谱法 以及高效液相色谱法 (HPLC)。其 中， 分离的内生真菌采用纯化 、纯培养 、刮菌丝 、对菌丝 HPLC 由于样品前处理简单 、直接进样 ，更加快捷和 进行有效物质 的提取制备得到样品提取液作为试验 准确成为 目前应用最多的色谱分析方法 ]。芦丁作 材料 。 为黄酮类 的主要成分 ，很早就被通过层析色谱法从 1．2 试剂与仪器 植物中分离[3]。有学者采用高效液相色谱法证 明了 芦丁标准品色谱级 (≥98Ao)，购 自阿拉丁试剂 植物的抗氧化性作用是芦丁成分 ]，说 明芦丁的作 公司