五灵胶囊中化学成分与药效作用的关系.pdfVIP

78 五灵胶囊中化学成分与药效作用的关系 沈敏，李晓伟，刘明义，王俊琴(第四军医大学西京医院药剂科，西安。710032) 中药复方制剂中有效成分的研究对其质量标准制定和工艺制备可控性有着重要意义，因此，对中 药有效成分的研究逐渐被人们所重视。我们曾对五灵胶囊中部分有效成分进行研究【l】，发现五味子醇 甲、丹参酮IIA、柴胡皂甙d是五灵胶囊中治疗肝损伤的有效成分；五灵胶囊终端产品与中间产品质 控指标为五味子醇甲、丹参酮ⅡA和柴胡皂苷D，确证这三者是否是五灵胶囊中药效学降酶的主要成 分很有必要，本实验采用正交设计，对五灵胶囊中化学成分变化与其药效的关系进行了探讨，以便为 选定质控指标提供依据。 l仪器与材料 贺利氏气体培养箱(德国HERAEUS公司)。 1．2试翔五味子醇甲、丹参酮IIA对照品购自中国药品生物鉴定所；柴胡皂苷d工作对照品由本室 aminotransferase aminotransferase ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(Aspartate AST)试剂盒，由北 anti—TNF_a、Rabbitanti— anti-CDl4、Rabbit 京中生北控生物科技股份有限公司提供；Rabbit NOSⅡ(iNOS)、Rabbit LPS 盒(福州迈新生物技术有限公司)；脂多糖(iipopdysaccharideUSA．Sigma公司)，精密称取 用前56℃灭活30分钟公司)； 1．3受试药物三种不同方法制备五灵胶囊采用HPLC测定五灵胶囊中五味子醇甲，丹参酮IIA和柴胡 皂苷d含量，回流提取减压浓缩法制备五灵胶囊每克药粉中含醇甲3．68mg，丹参酮ⅡAO．956mg、柴 皂营D6．78mg。 1．4动物昆明种小白鼠，雄性，体重30士29，SD大鼠，由第四军医大学动物中心提供，动物合格证 号：SCx 2方法与结果 2．1五味子醇甲含量铡定色谱柱：kromasilC-18；流动相：甲醇一水(13：7)，检测波长：250nm， 检测温度：室温，流速：0．8m1／min，理论板数按五味子系醇甲峰计不低于2000。线形回归方程为 Y=70156·X+5002 r=O．9995，五味子醇甲在2．5—12．5pg范围内呈现良好线性关系。 2．2丹参酮IlA含量测定色谱柱：HypersilC-18；流动相：甲醇一水(75：25)，检测波长：270hm， 检测温度：室温，流速：1。OmI／min，理论板数按五味子系醇甲峰计不低于2000。线形回归方程为 Y=106022·／-19264 r=-O．9994，五味子醇甲在2．5—12．5“g范围内呈现良好线性关系。 nm；室温 2．3柴胡皂苷d含量测定色谱柱：C-18柱；流动相：乙腈一水(40：60)；检测波长：204 469-卜2 检测；流速：1．0mL／min；理论板数按柴胡皂苷D峰计不低于3500。线性回归方程为Y--4 587 r=O．9997，柴胡皂苷D在25—150pg范围内呈现良好线性关系。 2．4正交试验方法与药效学试验选用提取方法(A因素)、给药剂量(B因素)、药物作用时间(C因 素)作为三个因素，每个因素设置三个水平，按正交表排列后进行试验，重复性试验测定ALT、AST 值作为药效指标，正交因素水平表见表1。昆明小鼠66只，体重30±2．09，雄性，置温度22—25C， 第十一届总直药学学术研讨会论文集 79 模型组(LPS组)；(3)一(11)正交试验组；实验前各组小鼠禁食，实验开始，II组小鼠除正常组 外其余10组小鼠尾静脉注射3．5mg／kgLPS，随即正常组与模型组小鼠ig给予蒸馏水lOml／kg，正 i 交9组小鼠均按表l g给予相应剂量