金华市首起诺如病毒感染性腹泻Real—Time RT—PCR检测.pdfVIP

2410 中国卫生检验杂志2008年 11月 第 l8卷 第 11期 ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology，Nov2008；Vol18 NoIl 【经验交流】 金华市首起诺如病毒感染性腹泻Real—TimeRT—PCR检测 陈志清 ，卢亦愚 ，王鸽 ，吴国平 (1．浙江省金华市疾病预防控制中心，浙江金华 321000；2．浙江省疾病预防控制中心，杭州 310051) [关键词] 诺如病毒；感染性腹泻；Real—TimeRT—PCR [中图分类号] R373 [文献标识码] C [文章编号] 1004—8685(2008)11—2410—02 诺如病毒是引起儿童和成人非细菌性腹泻的主要病原， N2F CAA GAGTCA ATG TI’IAGG I G I’G AG 常在社区、学校、托儿所、孤儿院、休养所、旅游船、养老院、医 N2R TCG ACG CCA TCTTCA n1CACA 院、军队及其他人群中引起暴发 ，具有发病急、传播速度快、涉 N2P FAM —TGG GAG GGC GATCGC AAT CT—TAMRA 及范围广等特点。据统计 ，每年诺如病毒在美国引起的感染 引物和探针由上海基康生物科技有限公司合成和标记。 占各种已知肠道传染病 的60％。在世界范围内，诺如病毒可 1．4 病毒RNA的提取 能占所有由食物引起疾病暴发的50％以上。近期 ，诺如病毒 用QIAGENRNeasy~MiniKit(50)试剂，直接取水样便适 在全球连续引起暴发流行。继欧洲、澳大利亚及北美地 区之 量4000rpm4~C离心 20min，取 Eppendorf管，加入 13—2ME 后，日本最近也暴发了25年来最严重的由诺如病毒引起的感 6 和RLT6OO ，然后小心吸取粪便离心上清液200 加 染性腹泻疫情。近年来我国的相关疫情报告也在增多。新近 入，剧烈振荡 1min。再加新鲜配制的75％乙醇600 ，用手 发展的实时荧光定量RT—PCR(Real—TimeQuantitativeRT— 颠倒 混匀。将混合液分 2次全部加入 同一离心柱 中 PCR)技术，利用PCR对DNA的高效扩增 ，探针技术的高特异 12000rpm4~C离心 15s，弃去液体。在柱子中加入 700t,l 性和光谱技术的敏感性高的特点，不仅克服了常规 PCR检测 RW1，12000rpm4~C离心15s，弃去离心液及2IIIl收集管。取 的不足，并且具有直观、重复性好、特异性强、敏感性高和易操 新的2ml收集管套在柱子下面，在柱子中加入 500 RPE， 作等特点…。我们建立了Real—TimeRT—PCR检测诺如病 12000rpm4~C离心 15S，弃去液体，重复一次后弃去液体及收 毒的方法，成功地应用到一起暴发疫情的实验室检测。 集管。换新的2rnl收集管套在柱子下面，15000rpm4~C离心 2min，将残留RPE去尽，弃去离心液及收集管。取新的Ep- 1 材料与方法 pendorf管套在柱子下面，加入 3O 无 RNase去离子水于柱 1．1 标本采集 子膜中央，静置 1min后 12000rpm4~C离心 1min收集 RNA 2007年3月浙江省金华市某高校感染性腹泻病例粪便标 (模板)，立即进行RT—PCR，剩余模板一80℃保存备用。 本7份，病例的主要临床表现为腹泻、腹痛、恶心呕吐，腹泻次 1．5 一步Real