脊柱结核病灶的手术切除范围探讨.pdfVIP

第二辑全萤骨芙1结核病专题研讨会 l材料和方法 1．1研究对象 10例，工人7例，其他3例。全部病例根据病史、体征、化验室检查及影像学检查获得临床诊断，经术 后病理检查得以确诊。 1．2主要设备及仪器 Leica 2500硬组织切片机。 清华紫光u1000透射扫描仪。 Leica体视显微镜 1．3术中取材 上述20例患者均行结核病灶切除手术，术中彻底清除病灶中央与硬化骨间空洞内的死骨、肉芽、干酪样 物质，然后以骨刀从病灶边缘开始逐层向病灶外围切除，直至“亚正常”椎体暴露出为止阳·…。选取带有 病灶中心、病灶边缘及病灶外围的整块骨质作为标本。(见图1) 1．4大体标本肉眼观察 将标本上的血迹用10％中性福尔马林液冲洗干净， 仔细观察其外观形态。 1．5不脱钙骨切片的制备 1．5．1标本的固定 所有标本均置于i0％中性福尔马林液中阎定 24小时以上”…。 I．5．2标本的脱水…’ 先用清水充分清洗固定后的标本，然后用酒精梯度脱水，具体为：70％酒精12小时，90％酒精12小 30小时，100％洒精I24小时，100％酒精II12小时，100％酒 时，95％酒精I30小时。95％酒精lI 精+100％乙醚(1：1)12小时。再用氯仿溶液I、Ⅱ、Ⅲ各脱水12小时。 I．5．3浸润液的配制与浸润 浸液I：甲基丙烯酸甲酯与邻苯二甲酸二丁酯以3：l的比例混合，磁力搅拌器搅拌2小时。 浸液II：甲基丙烯酸甲酯与邻苯二甲酸二丁酯以3：1的比例混合，每100mi液体中加人过氧化苯甲 酰1．59，磁力搅拌器搅拌4小时。 浸液Ⅲ：甲基丙烯酸甲酯与邻苯二甲酸二丁酯以3：l的比例混合，每lOOml液体中加入过氧化苯甲 酰4．09，磁力搅拌器搅拌4小时。 组织经脱水透明后进入浸液I、Ⅱ、Ⅲ各2天。 浸润过程中每天各抽真空4小时，以使浸液更好地渗入到组织深部。 i．5．4包埋 将新配制的浸液Ⅲ倒入特制20M玻璃瓶中，组织块的病灶中心、病灶边缘、病灶外围全部包括的一 面向下放入瓶中液体(切片时即切此面)，加盖橡胶瓶塞后室温过夜，第二天放入38C烤箱中聚合2—3天。 从烤箱中取出玻璃瓶，放入冰箱冷却10分钟，取出后可发现液体已凝固，砸碎玻璃瓶，取出已硬化 的组织块。 用钢锯、钢锉将组织块修成方形，并基本暴露出组织面，即可进行切片。 1．5．5切片 用Leica2500E重型切片机、钨钢刀修整组织面后开始切片。 切片厚度为49m，为保证进刀的顺利，防止刀刃崩裂或卷曲，使刀片和组织块保持湿润，用40％乙 ．133． 第二疆全国骨关节结核病专题研讨会 醇涂在刀口和组织块上。刀片保持一定的倾斜角度，同时控制进刀的速度。为防切片卷曲，将切片在70 ％的酒精中浸润一下，再入水浴，有利于展片。用毛笔沾95％的酒精尽可能将切片展平。 为防脱片，载玻片放在60的10％火棉胶、明矾溶液中3分钟，取出后置于40烤箱24小时备用。 切片展平置于防脱片处理后的载玻片上，将切片用保鲜膜纸覆盖、压实，置于37。C烤箱中48小时 后可行染色。 1．5．6染色及封片 全部标本采用Efi苯胺蓝法““、Goldner—Trichrome三色法”“、HE法染色。 各种染色均按各自流程严格操作。 (一)Goldner一伢ichro田e三色法染色 1．溶液配制： (1)亮绿染色液：亮绿黄(1ightgreen (2)磷钼酸溶液：磷钼酸1．09，溶于lOOml蒸馏水中。 iml，蒸馏水99m1。 (3)氯化铁溶液：三氯化铁2．59，浓HCI “)苏木素溶液：苏木素(Harrishematoxylin)1．259，溶于25％乙醇lOOml。 de de (5)丽春红(ponceauxylidine)储存液：丽春红(poneeau 100ml。 m1，蒸馏水100ml。 (6)酸性pin品红染色溶液：酸性品红1．09，冰醋酸l (7)丽春红——酸性品红储存