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《重组DNA原理与技术》实验教学大纲 学时：36学时 学分：2学分 课程性质：必修 实验个数：5个 适用专业：生物技术，生物工程 大纲执笔人：朱常香 大纲审定人：郑成超 一、实验课的性质与任务 本课程是一门专业实验课，综合了目的基因的分离、克隆，载体的构建等方面的实验内容，在注重专业性和可操作性的前提下突出先进性和系统性，加强教学内容的选择性。通过本课程的学习和实践，使学生对基因工程的全过程有系统、明确的认识，达到熟识、理解并掌握DNA重组实验原理和操作方法，提高分析问题和解决问题的能力，开拓创新能力，为从事生物技术及其相关领域的科学研究工作打下基础。 二、实验的目的与要求 本课程的目的是培养高年级本科生及研究生进行基因操作的能力。教学中，要求调动教学双方的主观能动性，组织学生参加实验准备，让学生和教师共同讨论理论和实验问题，指导学生分析总结实验结果，学会正确书写科学报告（论文）。 三、实验项目及内容提要 重组DNA原理与技术实验 序号 实验名称 学时 必开 选开 实验类型 内容提要 验证 基本操作 综合 设计 1 植物总DNA提取 10 √ √ 采用改进的SDS法提取转基因烟草总DNA ，为基因分离做准备 2 PCR方法分离基因 5 √ √ 设计引物，PCR扩增目的基因 3 基因克隆及载体构建 8 √ √ PCR扩增产物、克隆载体，限制性内切酶酶切后，在T4 DNA连接那的作用，将克隆的CP基因构建于克隆载体pUC19中。 4 大肠杆菌感受态的制备及质粒DNA的导入提取及向细菌转化 8 √ √ 制备大肠杆菌DH5感受态细胞，用热击法将质粒DNA转入大肠杆菌中，筛选阳性克隆 5 质粒DNA的微量提取及酶切鉴定 5 √ √ 用煮沸法小量提取质粒DNA，酶切后，电泳验证。 四、实验报告的格式 实验报告的撰写要求使用专用实验报告纸。实验报告的内容应包括：实验目的，实验的基本原理，实验用的仪器设备及试剂，实验操作程序，实验结果，实验应注意事项。 五、本课程考核方式、方法及实验成绩评定方法 考核及成绩评定把学生的实际动手能力放在重要地位。根据实验报告撰写情况及平时表现给予综合评定。 六、实验应配套的主要仪器设备及台（套）数 仪器设备名称 台（套）数 电泳仪 2 电泳槽 2 旋涡混合器 6 全温震荡培养箱 1 磁力搅拌器 6 液氮罐 1 pH计 1 冰箱 1 超低温冰柜 1 分光光度计 1 万分之一天平 1 百分之一天平 1 低温高速冷冻离心机 1 普通离心机 2 超静工作台 2 微量移液器 10（1000ul\200ul\20ul） PCR仪 1 微波炉 1 水浴锅 1 恒温水浴锅 1 制冰机 1 高压灭菌锅 1 附：教学参考书目 1、使用实验指导 《基因工程综合实验》操作手册。朱常香，宋云枝，刘学春等，2003。 2、参考书目 （1）《分子克隆实验指南》（第三版）。J·萨姆布鲁克，D·W·拉塞尔著，黄培堂等译。科学出版社，2002。 （2）《基因工程原理与技术》。王关林，方宏筠主编，科学出版社，1998。