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蛋白质的分离纯化技术研究进展 刘京 （江南大学食品学院，江苏无锡，214122） 摘要：蛋白质分离纯化是蛋白质产品工业化生产的关键之一。文中分析了蛋白质分离纯化的特点, 指出了分离纯化蛋白质应解决的一些问题。根据蛋白质的酸碱性质、分子大小与形状、溶解性质及其与配体亲和性等, 对其分离纯化方法进行了综述。 关键词：蛋白质; 提取; 分离; 纯化 Abstract：The protein mass separation purification is one of protein product industrialization production keys. In the article has analyzed the protein mass separation purification characteristic, had pointed out the separation purification protein should solve some questions. According to protein acid and alkali nature, molecular size and shape, dissolved nature and with ligand endophilicity and so on, separated to it purifies the method to carry on the summary. Keywords：protein; extraction; separation; purification 具有生理活性的蛋白质类物质在维持现代人类健康方面已必不可少，在医疗和食品领域已逐渐得到应用。蛋白质具有广泛的功能性质，每一种性质都会给食品及其加工过程带来特定的效果。因而可将这些功能蛋白质如乳清蛋白、蛋清蛋白、大豆蛋白等添加到食品中制得各种功能性食品。正是由于蛋白质与人类生活密切相关，所以对其质量和纯度要求也越来越高。蛋白质常存在于复杂的混合体系中，且稳定性较差，对温度、pH、机械剪切力等非常敏感、易于变性。因此本文针对近年来有关蛋白质的分离纯化技术所取得的进展进行了综述, 为今后的理论和应用研究提供依据。 1 蛋白质分离纯化的特点和存在的问题 1.1 蛋白质分离纯化的特点 1) 大多数蛋白质产品是生物活性物质, 在分离纯化过程中, 有机溶剂、溶液pH 值、离子强度的变化均可使蛋白质变性失活。 2) 蛋白质产品在物料中含量很低, 且物料组成非常复杂。例如, 利用基因工程菌发酵生产蛋白质, 物料中含有大量组成复杂的培养基、菌体生产代谢物等, 目标蛋白质的含量常常不到蛋白质总量的1%。有些目标蛋白质存在于细胞内或在胞内形成包含体, 为获取蛋白质, 还需进行细胞破碎, 结果物料中含有大量的细胞碎片和胞内产物。 3) 含蛋白质产品的物料不稳定, 蛋白质产品易受料液中蛋白水解酶降解。 4) 很多蛋白质产品作为医药、食品被人类利用, 因而要求蛋白质产品必须是高度纯化的,产品无菌、无致热源等。 1.2 实现蛋白质产品的分离纯化应解决的问题 1) 设计蛋白质产品分离纯化的最佳工艺, 用最少的分离步骤获得最大的产率, 同时确保蛋白质产品的纯度。 2) 发展蛋白质纯度的快速分析检测技术。在下游的各道工序, 准确、快速地对蛋白质产品进行纯度分析和活性检测, 以保证产品的质量。 3) 搞好上、中、下游技术的配合, 便于蛋白质产品的分离纯化。大多数蛋白质产品的分离纯化, 需消耗大量的人力、物力, 因此应尽可能改进上、中游技术, 减少下游过程负荷。 2 蛋白质的分离纯化技术 2.1 根据蛋白质分子大小不同的分离技术 蛋白质是一种大分子物质, 并且不同蛋白质的分子大小不同, 因此可以利用一些较简单的方法使蛋白质和小分子物质分开, 并使蛋白质混合物也得到分离。 2.1.1 超滤[1,2] 超滤法是利用压力或离心力, 使用一种特制的薄膜对溶液中各种溶质分子进行选择性过滤, 强行使水和其他小分子溶质通过半透膜, 而蛋白质被截留在膜上, 以达到浓缩和脱盐的目的。因此根据蛋白质分子大小的不同, 选择不同规格的滤膜进行超滤, 从而使蛋白质得到分离。樊晶等应用萃取- 超滤两步法从过期人血中提取人血红蛋白. 2.1.2 凝胶过滤层析[3,4] 凝胶过滤层析是一种简单而又有效的液相层析色谱技术。具有设备简单、操作方便、分离迅速及不影响分子的生物学活性等优点。目前已广泛应用于各种生物大分子物质的分离和纯化。 混合物随流动相流经装有凝胶作为固定相的层析柱时, 混合物中各物质因分子大小不同而被分离,在洗脱过程中, 分子质量最大的物质因不能进入凝胶网孔而沿凝胶颗粒间的空隙最先流出柱外, 分子量最小的物质因能进入