应用猪瘟抗原%2f血清ELISA测定猪瘟兔化弱毒疫苗中的病毒含量.pdfVIP

病毒病一猪瘟 应用猪瘟抗原／血清ELISA测定猪瘟兔化弱毒疫苗中的 病毒含量 唐红慧1·2冯志新。张道华1刘茂军1邵国青1甘源1刘冬阳1 刘冬霞1 刘大伟3王金虎3周勇歧3 (1．江苏省农业科学院兽医研究所·农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室·国家兽用生物制品工程技术研究 中心·南京天邦生物科技有限公司江苏南京210014；2．扬州大学兽医学院江苏扬州225009；3．南京天邦生物科 技有限公司江苏南京2儿102) 摘要简单．快速地测定猪瘟病毒的含量是猪瘟兔化弱毒疫苗(HcL、，)生产工艺中难以解决的技术之一。本 HerdCheck 试验通过应用猪瘟抗原／血清ELISA试刺盒(IDEXXCo．)，对已知滴度的24份HCLV半成品细胞苗和 21份成品疫苗进行抗原含量测定，结果24份HcLv半成品细胞苗95．83％与兔体定型热反应结果相符，检测敏感 性可迭20头份，瓶(或109个病毒拷贝教／瓶)。但该方法无法区分猪瘟病毒抗原与牛流行，胜腹泻病毒抗原。试验结 果证明，IDExx猪瘟抗原／血清ELIsA试剂盒能够稳定、快速、简单地用于HcL，V细胞苗的半成品与成品的病毒 含量测定，为疫苗生产的质量控制提供了一种可靠和稳定的方法。 关键词 HCLV；ELISA；HCL、7半成品细胞苗：HCL、7成品疫苗 前苦：猪瘟疫苗的质量控制是迄今尚未能解决的难题，其原因之一是猪瘟病毒(ClassicaIswine f．eVer vims，CSFV)在细胞上不形成细胞病变，在猪瘟细胞苗生产工艺中无法适时了解产毒量， 而《中华人民共和国兽片j生物制品规程》(2000年版)【ff规定的兔体定犁热反应法要一定时间并 且存在动物个体冈素干扰。凶此，寻求一个简单、快速、灵敏、准确的病毒含量测定方法对猪瘟 细胞苗生产工艺具有很覆大的意义。由中围兽医药品监察所所开发的猪瘟病毒实时荧光定量PCR (CSFV FQ．PCR)快速检测试剂盒灵敏、特异，但对设备和检验人员操作要求很高，一般牛物制 HerdCheck 药厂难以广泛使用。本试验廊用猪瘟抗原／血清ELISA试剂盒(IDEXXCo．)对已知滴 度的24份HCLV、}，I成品细胞苗和21份成品疫Iji进行抗原含量测定，评价了该试剂盒用丁．猪瘟疫苗 检测抗原含量的可行性。 l材料与方法 1．1材料 1．1．1待检猪瘟疫苗 1．1．1．1 HCLV半成品细胞苗 HcLv、}，．成品细胞苗由南京天邦生物科技有限公司提供，由原代乍睾丸细胞传代培养，具体 批次、收次和收毒时间见表l—l。 表1．1 HCLv半成品各批次、收次的收毒时间 收次 l 2 3 4 5 6 7 8 9 lO 1l 批次 4．244．28 5．6 5．10 5．185．22 090407①4．20 090407②4．21 5．3 5．7 5．1l 5．27 5．3 5．7 5．155．195．23 6．8 090409①4．29 090409(D4．29 5．3 5．7 5．19 5．27 注：收毒年份为2009年。 1．1．1．2 HCLV成品疫苗 由南京天邦生物科技有限公司提供，共21个批次，其中HCLV成品细胞莆8个批次、HCLV成 品脾淋荫13个批次，已经过兔体定型热反应和猪瘟荧光定量PCR检测。 334 第四次猪病学术研讨会会议论文集 1．1．2 BVDV(Bovineviraldiarrhea viru，BVDV)标准种毒 BVDV帆gonC24标准种毒，由中国兽医药品监察所提供，经原代牛睾丸细胞培养后收获病 毒液，1016‘5TCID50／rnL。 1．1