趋化因子融合蛋白SDF-KDEL慢病毒载体pLenti6／V5-S-K的构建和表达.pdfVIP

中国感染控制杂志2008年 11月第 7卷第 6期 ChinJInfectControlVol7No6Nov2008 ·367 · ． 论 著 ． 趋化因子融合蛋白SDF-KDEL慢病毒载体 pLenti6／V5一S-K的构建和表达 孙 利，曲晓莉，张久聪，张 颖，黄长形，连建奇，魏 欣，姜 泓，张 野，庄 严，翟 嵩，孙永涛，聂青和，白雪帆 (第四军医大学唐都医院，陕西 西安 710038) [摘 要] 目的 构建含趋化因子融合蛋白SDF-KDEL的慢病毒载体 pLenti6／V5一S—K，为研究 I型人免疫缺陷 病毒(HIV-1)感染的基因治疗奠定基础。方法 应用聚合酶链反应 (PCR)技术扩增 目的基因片段SDF-KDEL，纯 化后的PCR产物定向连接入 pLenti6／V5一D—TOPO~载体，构建慢病毒载体 pLenti6／V5一S—K，并在293FT细胞中 建立慢病毒株，最后转染人宫颈癌 HeLa细胞观察 SDF-1蛋 白的表达。结果 成功构建了慢病毒载体 pLenti6／ V5一S—K，并证实 SDF-1蛋白可在HeLa细胞系内表达。结论 慢病毒载体可介导CXC-细胞内趋化因子(CXin— trakine，SDF-K)基因高效、稳定转染 HeLa细胞，可用于抗HIV-1感染的基因治疗。 [关 键 词] 人免疫缺陷病毒，I型；趋化因子受体 ；细胞内趋化因子；慢病毒载体 ；基因治疗 ；SDF-KDEL；pLen— ti6／V5一S—K [中图分类号] R512．91 [文献标识码] A [文章编号] 1671—9638(2008)06—0367—05 ConstructionandexpressionoflentiviralvectorpLenti6／V5--S--KonSDF- KDEL SUN Li，QUXiao—li，ZHANGJiu—cong，ZHANGYing，HUANGChang—xing，L A』＼，Jian一 ， WEJXin，JIANGHong，ZHANGYe，ZHUANGVan，ZHAISong，SUN Yong—tao，NIE Qing-he，BAIX fan (TangduHospital，FourthMilitaryMedicalUniversity，Xian710038， China) [Abstract] Objective TostudytheHIV-basedlentiviralvector，pLenti6／V5一K，whichcontainsthegeneofin— terest，CXC-intrakine(SDFKDEL)，onthegenetherapyofHIV一1infection．Methods A pLenti—basedexpression vector，pLenti6／V5一I)IT0PO，wasusedtoproducethelentiviralvector，whichwascotransfectedwiththeViraP— owerMT PackagingMix(pLP1，pLP2，andpLP／VSVG)into293Frcellstoproduceareplication-incompetentlenti— viusstock．AfterlentiviralstockhadbeentitratedthebyHeLacells，theexpressionoftheinterestgeneofofs】)F_ 1couldbeassayedbyindirectimmunofluorescenceintransducedHeLacells．Results Thelentiviralexpressionvee— tor，pLenti6／V5一 K，wasconfirmedbyrestrictionenzymedigestionandsequencing．Thelentivirusstockwascon— struetedin293Frcellline．Thefluorescentproteinwasmainlyscattere