前沿洗脱色谱中溶质突破曲线的研究.pdfVIP

前沿洗脱色谱中溶质突破曲线的研究 边六交 耿信笃* 西（北大学现代分离科学研究所 西安 710069） 提要 考虑了溶质与色谱固定相间的相互作用和固定相表面上活性点总数不变以及溶质在柱内的质量平衡， 推导出了描述溶质在前沿色谱中突破曲线的基本方程，对此方程的性质进行了初步讨论，并将实验测定的几种 生物大分子的洗脱曲线与本文推导出的方程进行了比较，获得了结果的一致性。 关键词 前沿色谱，突破曲线，蛋白质 其中，α表示活度，在流动相中为mmol/mL，在填料 1前言 表面取mg/m2；K1为溶质与填料相互作用的平衡常 前沿色谱法 F（rontalChromatography）是一种 数，K1愈大，表明溶质与固定相的作用力愈大。 具有特殊用途的色谱分析方法，它在痕量组分的富 当色谱柱一定时，填料质量也一定，在一定的流 集和分离、化学反应历程的监测和化学反应动力学 动相组成和溶质浓度下，其表面上总活性点个数也 参数的测定[1-3]以及溶质在不同介质表面上的吸附 一定，故对应的活性点簇个数na也应当一定： 行为的研究等方面[4-9]都有重要用途。但到目前为 止，这种色谱法的一个基本问题，即描述溶质在柱后 其中So为填料的总表面面积。 的突破曲线方程并没有得到解决。因此，文献中报道 上式左边第一项为填料表面吸附的溶质所占有 的有关这方面的数据会因来源不同而异，使得置信 的活性簇，第二项为尚未吸附溶质的活性簇。 度和精确度受到怀疑。本文在建立前沿色谱柱的物 2.2溶质在柱内的积累平衡 理模型的基础上，从热力学方面推导出了溶质在前 溶质与填料相互作用时，在柱内溶质的总量应 沿色谱中的突破曲线，并以实验进行了验证。 为进入柱 口溶质的总质量与流出柱溶质质量之差。 柱内的溶质总量包括两项：被固定相吸附的溶质量 2 溶质在前沿色谱上突破曲线的推导 asLSo和未被吸附的在色谱填料空隙间的质量asVo 其（中Vo为柱内流动相的体积）。在时间为t时进入 色谱柱是由一根内充某种色谱填料的柱组成。 柱内的溶质的总质量应为FCbt其（中F为流动相流 当流动相载着溶质通过此填料时，因溶质与填料和 速，Cb为流动相中溶质的分析浓度），而在t时流出 流动相的相互作用力的差异而得到分离。假设溶质 柱的溶质的质量为asFt，由质量守恒定律可知： 与填料的相互作用是通过分布在填料表面上的活性 点进行的，为便于数学处理，我们定义一个活性簇是 由我们已定义过的一些活性点[10]组成，它对应于一 2.3 溶质在前沿色谱中突破曲线的推导 依据上述的色谱柱模型和基本方程可得出所期 个溶质分子。此处，我们还假定这种活性簇在该填料 望的描述溶质在前沿色谱中的突破曲线方程。 表面上是均匀分布的。于是溶质在柱内发生的作用 过程可处理如下： 将式 2（）中的αL代入式 3（得： 2.1溶质与填料的相互作用 当一个溶质分子S被色谱固定相表面吸附时， 形成溶质-固定相 “络合物”，并可用下述反应表示： 其中L表示在填料表面上的一个活性簇，而SL则 表示一个已被溶质占据了的活性簇。 因式 1（为