发酵法生产L异亮氨酸的研究进展.pdfVIP

EMP、HMP、TcA、乙醛酸循环、伍德一沃克曼反应，以物a一氨基丁酸(a—AB)等抗性突变株可以遗传性的解 及苏氨酸合成水平和分支链氨基酸合成水平的调节 除异亮氨酸对苏氨酸脱氨酶的反馈抑制，有利于积累 控制，其生物合成途径如图1所示。 L一异亮氨酸。 葡学糖- 丙氨酸’… 异亮氨酸合成途径的第2个限速酶，受缬氨酸的反馈 抑制以及缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸的多价反馈阻遏。 筛选缬氨酸结构类似物如a一氨基丁酸(a—AB)、2一噻唑 丙氨酸(2一TA)等抗性突变株来活化该酶。 在谷氯酸棒杆菌发酵生产L一异亮氨酸过程中， 谷氨酸比天冬氨酸优先合成，谷氨酸在细胞内积累到 一定浓度后，反馈抑制谷氨酸脱氢酶，使细胞的代谢 转向天冬氨酸。在黄色短杆菌发酵生产L．异亮氨酸 过程中，蛋氨酸优先合成，蛋氨酸过剩时，会反馈阻遏 高丝氨酸转乙酰酶的合成，转而合成苏氨酸和异亮氨 酸。天冬氨酸合成异亮氨酸的初始酶天冬氨酸激酶 受赖氨酸和苏氨酸的协同反馈抑制，因此切断向赖氨 反馈阻遏——反馈抑制 酸的合成途径，可以积累中间代谢物苏氨酸，于足终 图1 L一异亮氨酸的生物合成及代谢调节 产物L一异亮氨酸积累浓度增加。 2．2 L一舁亮氨酸的生物台成及代谢调控 3 异亮氨酸的代谢调控育种 L一异亮氨酸生物合成的基本调节机制有反馈控 制和在合成途径分枝点处的优先合成。在它的生物 3．1代谢调控育种机理 合成的主代谢流中，有5个关键酶控制其强度，它们 异亮氨酸发酵过程是典型的代谢控制发酵，以生 分别受不同的代谢产物的反馈调节，活化这些酶有利 物化学和遗传学为基础。研究代谢产物的生物合成 于异亮氨酸的生物合成。 途径和代驸调节机制，选择巧妙的技术路线，通过遗 (1)磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(Pc，Ec传育种技术获得解除或绕过微生物正常代谢的突变 4．1．1．38)Pc是介于合成和分解代谢物定向途径上株，从而人为地使有用产物选择性地大量合成和积 的第1酶，受天冬氨酸、苹果酸的反馈抑制，受天冬氨 累。苏氨酸是异亮氨酸的前体物，设法解除对苏氨酸 酸、谷氨酸的反馈阻遏，为乙酰CoA、GDP、GTP或二生物合成的反馈控制，增强苏氨酸的生物合成，町以 磷酸果糖等所激活。 增加异亮氨酸的积累。另外，通过切断支路代谢选育 (2)天冬氨酸激酶(AK，E．c．2．7．2．4)AK受苏营养缺陷型突变菌株，或通过解除反馈调节选育结构 氨酸和赖氨酸的协同反馈抑制。通过选育赖氨酸营 类似物抗性突变株，均可提高产生菌积累异亮氨酸的 养缺陷型切断由天冬氨酸半醛向赖氨酸的合成途径， 能力o“。例如，蛋氨酸是异亮氨酸合成支路的代谢 使代谢流更加畅通，积累中间代谢物苏氨酸，从而使 物，比苏氨酸优先合成，即蛋氨酸合成过量后才能使 终产物L异亮氨酸积累。 代谢流转向合成苏氨酸，进一步合成L一异亮氨酸。 (