花色改造基因工程研究进展.docVIP

花色改造基因工程研究进展 摘要 1987年世界首例成功运用转基因技术改造矮牵牛花色以来，花色改造基因工程技术不断被证明其在培育新花色品系上的无穷魅力。本文介绍了近年来运用基因工程技术成功改造花色的主要三种策略： 1.采用反义RNA及共抑制的方法来改变花颜色的深浅；2. 通过导入新基因产生新奇花色；3. 利用转座子构建特殊表达载体，随机激活花色合成的基因来产生嵌合花色。另外，本文还对转基因株花色不稳定原因进行了讨论。 关键词 花色花色素苷基因工程 　　花是观赏植物的主要观赏器官。自然界花色种类繁多，但一些重要花卉却色彩有限，如月季、郁金香、康乃馨缺少蓝色和紫色；非洲紫罗兰、仙客来、天竺葵、矮牵牛缺少纯黄色；鸢尾、紫罗兰等缺少红色和砖红色，这些是运用传统杂交育种方法无法解决的问题。因此，对花色基因的研究具有重要的意义，一方面使人们有可能对花色进行人工修饰，进一步提高其观赏和商品价值；另一方面，由于花色的明显可见性，花色基因可作为看得见的标记基因，用于研究基因的表达、调控等。 　　花色素苷是影响花的主要色素，控制花从红色至紫色、蓝色的一系列变化，其含量的增高或降低都可能改变着花的颜色。目前对属于类黄酮的花色素苷的合成代谢以及与之相关的基因研究得较为深入，而且已被应用于改造花色的研究中。下面将介绍成功进行花色改造的基因工程技术和成果。 1 花色变淡 　　导入植物内源色素基因的反义 (antisense)基因或正义（sense）基因, 抑制内源色素基因的活性，造成无色底物的积累，使花色变淡或变白。 1.1 反义RNA技术（antisense suppression） 　　将某一基因反向插入植物表达载体，然后导入植物体内，这种“错误”的 DNA转录成RNA之后，与内源的互补mRNA结合，使mRNA不能合成蛋白质，以此达到抑制靶基因表达的目的，也即达到修饰目标性状的目的，实现花色的改变。1988年，vander Krol等 [1] 首先采用此法获得了矮牵牛花色变异新品种，他们将编码查尔酮合成酶 (chalcone synthase，CHS)的结构基因反向导入矮牵牛植株，转基因株的花色由紫色变成白色，且不同株系表现出不同程式的花色变异。Aida等 [2] 分别将反义 DFR ((dihydroflavonol 4-reductase)和 CHS 导入蓝猪耳中，转基因株系的花冠花色素苷含量均呈不同程度的减少，结果产生多种新花色图案，如花冠檐上深着色部分呈波浪形或某些唇瓣着色较深。转反义 CHS 的株系，花筒和花冠檐的花青素苷色均同等程度减少，花颜色趋于红色；而转 DFR 基因株系冠檐的花色素苷含量减少程度比冠筒的大，转化株因积累了大量的黄酮、黄酮醇物质，因而转化株花的颜色显得更蓝。一般而言，采用反义 RNA技术转化结构基因，均在不同程度上减少花青素苷的含量，花色也相应的变淡。该方法也已成功地应用于改造其它多种花色上 [3，4] 。 1.2 共抑制法（sense suppression或cosuppression） 　　即通过导入一个（或几个）与内源基因同源或异源（但序列应与内源基因具高度同源）基因，达到抑制该内源基因转录产物的积累，进而抑制该内源基因表达的技术。共抑制现象是于 1990年Jorgenson教授实验室 [5] 发现的，他们本想将 CHS 导入矮牵牛，通过 CHS 在细胞中的超表达（overexpression）加深花的颜色，但实验结果出乎他们的设想。转化株的花色素苷合成受到抑制，42%的转化株产生完全白花和紫白嵌合花。但转化株花色的遗传不稳定。现在共抑制现象已在多种植物上发现并被应用于基因功能、基因活性网络调控上的研究。Aida等 [6] 分别将 DFR 和 CHS 导入蓝猪耳中，转基因株系的花冠花色素苷含量均呈不同程度的减少，位于花筒的花色素苷含量减少程度大于花冠檐，花筒的颜色几近白色。发生共抑制与导入基因的拷贝数以及两个基因之间的同源性程度密切相关 [7，8] 。在矮牵牛的花冠组织中有两个 CHS 基因： CHS-A 的 mRNA约占90%， CHS-J 的占 10%，这两个基因在编码区处具85%的同源性。导入 CHS-A 编码区的开白花的矮牵牛中，不仅 CHS-A 被抑制而且 CHS-J 也被抑制。这说明产生共抑制并不需要两个基因序列完全相同。菊花的 CHS 和 DFR 基因与矮牵牛的具 70%的同源性。当将来源于矮牵牛的 CHS 导入矮牵牛中， 48个转化株中有8株出现的共抑制现象，而换成来源于菊花的 CHS ，则在调查的 97株转化株中，没有发现有共抑制的现象。改用 DFR 也得到同样的实验结果 [7] 。转化的品种也影响了共抑制的发生， Huits等 [9] 发现矮牵牛的