酵母核糖核酸的分离及组分鉴定.docVIP

酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 　　一、目的 　　了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。 　　二、原理 　　RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在 碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀， 由此即得到RNA的粗制品。 　　核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。 　　三、器材　　　　四、试剂和材料　　 　　2 mL 10％三氯化铁溶液（用FeCl3·6H2O配制）加入 到400 mL浓盐酸中。 　　910 mL 　　6g苔黑酚于100 mL 95％乙醇中（可在冰箱中保存1个月）。 　　1050 mL 　　1）17％硫酸溶液 将17mL浓硫酸（比重1.84）缓缓加入到83 mL水中。 　　2）2.5％钼酸铵溶液 将2.5g钼酸铵溶于100 mL水中。 　　3）10％抗坏血酸溶液10g 抗坏血酸溶于100 mL水中，贮棕色瓶保存。溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄或棕色则失效，需纯化抗坏血酸。 　　3种溶液与水按如下比例混合。 　　172.5％钼酸铵溶液∶10％抗坏血酸溶液∶水=1∶1∶1∶2（V／V）。 　　11200 g 　　五、操作 　　15g酵母悬浮于90 mL 0.04 mol／L氢氧化钠溶液 中，并在乳钵中研磨均匀。将悬浮液转移至150毫升锥形瓶 中。在沸水浴上加热30分钟后，冷却。离心（3000 r／min）15分钟，将上清液缓缓倾入30 mL酸性乙醇溶液中。注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待核糖核酸沉淀完全后，离心（3000 r／min）3分钟。弃去清液。用95％乙醇洗涤沉淀两次，乙醚洗涤沉淀一次后，再用乙醚将沉淀转移至布氏漏斗中抽滤。沉淀可在空气中干燥。 　　200 mg提取的核酸，加入1.5 mol／L硫酸溶液10 mL，在沸水浴中加热10分钟制成水解液并进行组分的鉴定。 　　11mL加入过量浓氨水，然后加入约1mL0.1mol／L硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀。 　　21支试管加入水解液1mL、三氯化铁浓盐 酸溶液2 mL和苔黑酚乙醇溶液0.2mL。放沸水浴中10分钟。注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。 　　3 1支试管，加入水解液1mL和定磷试剂1mL。在水浴中加热，观察溶液是否变成蓝色，说明磷酸是否存在。 思考题 　　1RNA的粗制品？ 　　2RNA组分是什么？怎样验证的？